应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 原代心肌细胞培养
52/1返回列表
查看: 3215  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zxz91

铜虫 (小有名气)

[求助] 原代心肌细胞培养 已有5人参与

我目前正在做原代心肌细胞培养，但结果不太理想，死细胞特别多，贴壁细胞很少，并且观察不到搏动。现将整个造作流程写出，请求做原代心肌细胞培养成功的大师们给点建议：培养液为含10%血清（BI）及1%双抗的DMEM高糖，胰酶为碧云天的浓度0.25%含0.02%EDTA。
KM乳鼠75%酒精消毒后取心于预冷的培养液中，清洗血管及纤维组织后转移到另一遇冷的培养液中，将心脏剪碎，每颗心剪成2-3块，吸至15ml离心管，胰酶清洗，上清液弃去，之后加组织块2倍体积的胰酶，37度水浴消化20s，取上清用培养液终止消化，反复操作，直至组织块消化完全。200目滤网3层过滤，1500转，离心5min，制成细胞悬液，种到培养瓶中，90min后分离心肌与成纤维。
请问该过程哪里有问题吗？细胞为什么不活？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-03-25 18:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

i尚雪雪

木虫 (初入文坛)

公主

【答案】应助回帖

我也在养，一直养不活，今天看到这个受教了，按大师们说的做做试试，多谢
赞一下 回复此楼
2016，加油少年！
11楼2014-12-18 18:24:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

真心的笑

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-25 22:26:37
乳鼠取1-3d的，只取心尖部分，剪成0.5-1mm3大小。0.25%胰酶先软化5分钟，弃上清；0.08%胰酶消化（4-6mL)8min,消化7-8次(消化时放在培养箱里面封口消化，每2min拿出来震摇一下），收集每次上清（先轻微吹打10到15次），加入等体积的DMEM终止消化。1000转，离心8分钟，200目过滤后，接种到培养瓶中，差速贴壁2h.你试试。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-25 20:50:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxz91

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 真心的笑 at 2014-03-25 20:50:25
乳鼠取1-3d的，只取心尖部分，剪成0.5-1mm3大小。0.25%胰酶先软化5分钟，弃上清；0.08%胰酶消化（4-6mL)8min,消化7-8次(消化时放在培养箱里面封口消化，每2min拿出来震摇一下），收集每次上清（先轻微吹打10到15次） ...

谢谢，给我指出一条道路。我想按您说的方法试一试，但有几个疑惑想请教一下，用0.25%胰酶软化5min不会笑话过吗？之后用0.08%的胰酶，可以用0.1%的胰酶吗？差别会很大吗？
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-27 09:13:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenxiangfan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-03-27 09:32:08
我也是用的碧云天的胰酶，消化的时候用锡箔纸封口，在水浴中微微的震荡，5-6分钟，吸取上清要彻底些，反复7-8次。还有就是养心肌细胞最好可以用层黏连蛋白预处理包被，这样促进贴壁和存活，还有就是差速贴壁后要用BRDU除去杂细胞，比如成纤维细胞。
赞一下 回复此楼
梅花香自苦寒来
4楼2014-03-27 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭