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[交流]
心肌细胞培养交流
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以下是我的实验步骤 1. 2-4天大鼠乳鼠酒精浸泡15秒,取心,置于有4度pbs的培养皿中,用pbs清洗2遍 2. 剔除心脏周围的血凝及纤维组织,抽取5ml胰酶,少量放入50ml烧杯中,大部分(留点冲洗)倒入50ml离心管,将心脏放入小烧杯剪碎,倒入50ml离心管,用剩余的胰酶冲洗一遍。 3. 消化:将含有心肌的50ml的离心管放入34℃的水浴锅中10min,轻轻晃动数次。第一次消化液弃去。以后消化为8分钟(中间摇晃几次)。 4. 离心:补加3ml 胰酶入2步骤中的离心管,继续消化。第二次以后的消化液轻轻吹打,自然沉淀,各取2ml上清放入2 只(1,2号)离心管,再各加入2mlDMEM离心8分钟(1000转)。离心好的1,2号离心管,弃上清,加1mlDMEM重悬,收集于一只15ml离心管中。 5. 重复消化和离心。将所有离心过的细胞重悬后收集于离心管,再次离心8分钟,弃上清,加入含有20%胎牛血清、双抗、brdu的DMEM 4ml,重悬,过100、200目不锈钢筛网。 6. 过筛后的细胞液放入细胞瓶,90min差数贴壁。调整细胞浓度500000个每毫升。种于24孔板中。我6只大鼠乳鼠心脏种了6孔。24小时换液,此后隔日换液。 结果: 离心后细胞数目较多,细胞小而圆。 24小时换液后,细胞数目明显减少,贴壁细胞稀疏,小而圆,部分会抖动。 48小时观察,细胞小,量少,不动 交流: 第一次换液,48小时会不会好一点? 我的细胞24小时的时候都是圆的是怎么回事? 有没有哪位高人有成熟的心肌细胞培养方法?? 胶原酶好贵啊。。真心用不起诶。。。哭。。。 |
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