应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » Red同源重组
51/1返回列表
查看: 3431  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

预防凯凯

新虫 (初入文坛)

[求助] Red同源重组 已有2人参与

我用Red同源重组的方法缺失沙门氏菌的氟苯尼考耐药基因floR，但是在转pKD4的时候老是打靶不进去，这是为什么？我的打靶引物是50bp的同源臂+20bp的卡那霉素的抗性基因引物，这跟floR基因有关吗？ 这个基因是质粒上有染色体上也有？ 有高手吗，求助啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-24 20:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

预防凯凯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2014-03-31 21:18:44
我用RED重组敲除副溶血弧菌的基因,用的是pkd46和pkd3,楼主用pkd46了吗?

用了啊，先转进pKD46，然后用L阿拉伯糖诱导的，不过现在已经做出一株了，但是不知道怎么算缺失的长度，关键不知道卡那霉素的抗性基因是多大，哎
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-07 22:11:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yixibiyu

木虫 (正式写手)
我最开始做的时候也总是做不出来不，但有几点你得注意：
   1. 电转的条件，包括电压和时间；
   2. 敲入片段的浓度，尽量浓一些；
此外，板上的抗性你可以少加一些，我当时用的是25ug/ml的量。

因为我们做的菌种不同，所以以上意见仅供参考。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-26 19:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
虽然Red的理论重组臂在50bp就满足了，但还是设长点比较好，加长重组臂在200bp。
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-27 10:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

预防凯凯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yixibiyu at 2014-03-26 19:02:00
我最开始做的时候也总是做不出来不，但有几点你得注意：
   1. 电转的条件，包括电压和时间；
   2. 敲入片段的浓度，尽量浓一些；
此外，板上的抗性你可以少加一些，我当时用的是25ug/ml的量。

因为我们做的 ...

嗯，好的，谢谢，我的是2000V，5ms，打靶片段浓度为200-400ng/uL，感觉挺高了啊
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-27 22:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +8 February_Feb 2026-03-01 8/400 2026-03-02 13:13 by relum
[考研] 化工270求调剂 +8 什么名字qwq 2026-03-02 8/400 2026-03-02 13:03 by houyaoxu
[考研] 0805总分292，求调剂 +8 幻想之殇 2026-03-01 8/400 2026-03-02 12:51 by 无际的草原
[考研] 272求调剂 +7 材紫有化 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:48 by 无际的草原
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[考研] 275求调剂 +4 明远求学 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:45 by 无际的草原
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[基金申请] 成果系统访问量大，请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便，敬请谅解。 +5 xhuama 2026-03-02 5/250 2026-03-02 12:34 by stidwellNK
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 9/450 2026-03-02 12:04 by 52hz~~
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+4 ，！？ 2026-03-02 6/300 2026-03-02 11:07 by 黑！在干嘛
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 7/350 2026-03-02 10:38 by lature00
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭