24小时热门版块排行榜    

查看: 3453  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

预防凯凯

新虫 (初入文坛)

[求助] Red同源重组 已有2人参与

我用Red同源重组的方法缺失沙门氏菌的氟苯尼考耐药基因floR,但是在转pKD4的时候老是打靶不进去,这是为什么?我的打靶引物是50bp的同源臂+20bp的卡那霉素的抗性基因引物,这跟floR基因有关吗? 这个基因是质粒上有染色体上也有? 有高手吗,求助啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

预防凯凯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yixibiyu at 2014-03-28 13:32:18
那楼主试试加长同源臂的长度吧,我一般是45bp。楼主知道沙门氏菌从哪可以弄到吗?我想从它的基因组里扩增一个基因。...

我们的沙门氏菌是在兽医院临床分离到的,如果你想要的话,可以去那边看看,或者可以到当地的疾病控制中心看看,应该也能分离到,或者在微生物保种中心应该也会有沙门氏菌的标准株的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2014-03-29 23:50:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yixibiyu

铁杆木虫 (正式写手)

我最开始做的时候也总是做不出来不,但有几点你得注意:
   1. 电转的条件,包括电压和时间;
   2. 敲入片段的浓度,尽量浓一些;
此外,板上的抗性你可以少加一些,我当时用的是25ug/ml的量。

因为我们做的菌种不同,所以以上意见仅供参考。
2楼2014-03-26 19:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
虽然Red的理论重组臂在50bp就满足了,但还是设长点比较好,加长重组臂在200bp。
3楼2014-03-27 10:28:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

预防凯凯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yixibiyu at 2014-03-26 19:02:00
我最开始做的时候也总是做不出来不,但有几点你得注意:
   1. 电转的条件,包括电压和时间;
   2. 敲入片段的浓度,尽量浓一些;
此外,板上的抗性你可以少加一些,我当时用的是25ug/ml的量。

因为我们做的 ...

嗯,好的,谢谢,我的是2000V,5ms,打靶片段浓度为200-400ng/uL,感觉挺高了啊
4楼2014-03-27 22:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求材料,环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 081700 调剂 267分 +7 迷人的哈哈 2026-03-23 7/350 2026-03-23 23:19 by 星空星月
[考研] 材料292调剂 +4 橘颂思美人 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:16 by peike
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 材料专硕英一数二306 +8 z1z2z3879 2026-03-18 8/400 2026-03-23 20:49 by baobaoye
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
信息提示
请填处理意见