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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教大鼠血浆标准曲线问题 已有4人参与

在做标曲实验时,比如我用了200 μl的血浆,加入了浓度为100 ng/ml的药物甲醇溶液200 μl,后面用200μl的流动相复溶。那我在算这个标曲的血药浓度时需要考虑加入的甲醇的量吗?就是说这个点的血药浓度是按100 ng/ml算还是按50 ng/ml算呢?
谢谢
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wsh14

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+3, 鼓励应助 2014-03-17 13:05:38
清清柳岸枫: 金币+1, 有帮助 2014-03-22 07:48:47
需要,不同浓度都要用200μl。由于提取率的问题,不能说所要药物都提取出来,然后除以复溶溶剂体积来算浓度。因为血浆有200μl,所以还是按50ng/ml算。
2楼2014-03-17 11:54:15
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richbird

捐助贵宾 (著名写手)

小木虫二手科学家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清清柳岸枫: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2014-03-22 07:48:36
你描述省略了好几个步骤,我猜测如下:标准曲线制备方法为空白血浆200uL,加入浓度为100 ng/mL的药物甲醇溶液200uL,震荡沉淀蛋白。提取上清,挥干。然后用200 uL的流动相复溶。待测样品为
200 uL血浆加入200uL甲醇,后续操作同标准曲线。
假如是这样,那么你标曲里面的浓度应当为100 ng/mL,而不是50 ng/mL。
另外,提醒一下,你这种提取方法会有争议。
一步步实现自己的理想,永远不要停下脚步。
3楼2014-03-18 14:25:14
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hanxizhen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我自己当初在做药动试验的时候,做血样的标准曲线时,将对照品和自己的检测血样都是在同一个条件下进行制备的,所以没有考虑加入甲醇的量,因为是平行的。
加油
4楼2014-03-18 16:14:48
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by richbird at 2014-03-18 14:25:14
你描述省略了好几个步骤,我猜测如下:标准曲线制备方法为空白血浆200uL,加入浓度为100 ng/mL的药物甲醇溶液200uL,震荡沉淀蛋白。提取上清,挥干。然后用200 uL的流动相复溶。待测样品为
200 uL血浆加入200uL甲醇 ...

谢谢,我不是用沉淀蛋白做的,我是这样:标准曲线制备方法为空白血浆200uL,加入浓度为100 ng/mL的药物甲醇溶液200uL,振荡,加入乙酸乙酯3ml,振荡,离心,取上清,吹干,200 uL的流动相复溶。然后浓度我是按100 ng/mL算的……
5楼2014-03-19 08:50:26
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richbird

捐助贵宾 (著名写手)

小木虫二手科学家

引用回帖:
5楼: Originally posted by 清清柳岸枫 at 2014-03-19 08:50:26
谢谢,我不是用沉淀蛋白做的,我是这样:标准曲线制备方法为空白血浆200uL,加入浓度为100 ng/mL的药物甲醇溶液200uL,振荡,加入乙酸乙酯3ml,振荡,离心,取上清,吹干,200 uL的流动相复溶。然后浓度我是按100  ...

根据当前的提取方法,按照100 ng/mL计算是正确的。
一步步实现自己的理想,永远不要停下脚步。
6楼2014-03-20 09:13:45
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

血浆200ul,最后体积还是200ul,那么你的浓度就是血浆中的浓度,100ng/ml;
在往血浆中加化合物的时候可以考虑现将甲醇挥干后加入空白血浆,然后加萃取液;
7楼2014-03-20 09:27:39
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st.nova2012

新虫 (小有名气)

没有问题,100ng/mL

你样品血浆的处理和加标血浆的处理应当是完全一样的。
空白血浆加过标准品储备液后的处理跟样品处理只要是一样的,就行了,不用再考虑回收率了。不过你既然用甲醇溶解的标准品,那么样品血浆不管你怎么处理,还是要加上这200μL的甲醇的
8楼2014-03-27 16:33:09
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zhangjingle

新虫 (初入文坛)

只要保证做标准曲线的方法和给药样品的测定方法一样,用100ng/ml和50ng/ml是都可以的,如果你测定标准曲线用的浓度是血浆里边的药物浓度即50ng/ml,那么给药样品就按血浆中的药物浓度即稀释两倍后的;如果测定标准曲线用的浓度是100ng/ml,那么给药样品的测定你就按没有稀释的浓度,也就是流动相稀释后的浓度进行测定就可以了。希望有帮助到你。
9楼2014-08-22 09:33:04
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zhangjingle at 2014-08-22 09:33:04
只要保证做标准曲线的方法和给药样品的测定方法一样,用100ng/ml和50ng/ml是都可以的,如果你测定标准曲线用的浓度是血浆里边的药物浓度即50ng/ml,那么给药样品就按血浆中的药物浓度即稀释两倍后的;如果测定标准曲 ...

多谢,不过已经毕业啦!
10楼2014-08-22 14:44:30
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