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kankan19858578

金虫 (正式写手)

[求助] 关于用DPPH法测定自由基清除能力 已有1人参与

方法:
1) 样品配制:0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1g/L的对香豆酸甲醇溶液
2) 0.2mL样品+5mL 2×10-4M DPPH                                              A
0.2mL样品+5mL 95%甲醇                                      B
0.2mL去离子水+5mL  2×10-4M DPPH                                    blank1
0.2mL去离子水+5mL   95%甲醇                           blank2
25℃反应30min,4000rpm离心10min,上清液517下测A值
P(%)=[1 - (A1-A2)/A3]×100
A1=A517 of A;A2=A517 of B;A3=A517 of blank1 - A517 of blank2
    各位做过相关实验的朋友,为什么我按照以上方法做,三十分钟以后A和B的颜色差不多啊,DPPH的紫色没有明显变浅啊!?
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wlw1002

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
kankan19858578: 金币+50 2014-03-14 10:04:42
我们是这样做的
取0.2 mmol/L DPPH 2 mL于比色管中,加入2 mL不同浓度(0、0.5、1、2、5、10 mg/mL)的样品溶液,于室温下避光静置30 min,以70%乙醇水溶液作参比,在517 nm下测定吸光度,记为A0;以等量蒸馏水代替样品溶液,测定其吸光度,记为A1。取2 mL待测液加2 mL溶剂,测定吸光度,记为A2。按下式计算DPPH•清除率。以同样的方法测定Vc的DPPH•清除能力,作为对照。
DPPH•清除率/%=[1-(A1-A2)/A0]×100
2楼2014-03-14 09:22:33
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普通回帖

wlw1002

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

刚才的那个弄错了,我们与你的方法一样,A和B的颜色差不多可能是因为样品的清除自由基的能力不强,可以加大浓度试试
3楼2014-03-14 09:35:19
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wlw1002

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们加DPPH后不离心,是不是离心带来的?
4楼2014-03-14 09:43:22
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wlw1002

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

才搞明白!A和blank1比才说明DPPH是否变浅,因为A是样品加DPPH应该是紫色或紫色褪去(看样品的浓度和清除能力),blank1是水+DPPH  ,是紫色, B中是样品加甲醇,B应是样品本身颜色,A和B颜色差不多说明清除能力很强啊
5楼2014-03-14 09:57:09
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kankan19858578

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wlw1002 at 2014-03-14 09:57:09
才搞明白!A和blank1比才说明DPPH是否变浅,因为A是样品加DPPH应该是紫色或紫色褪去(看样品的浓度和清除能力),blank1是水+DPPH  ,是紫色, B中是样品加甲醇,B应是样品本身颜色,A和B颜色差不多说明清除能力很强 ...

我的样品对香豆酸是没有颜色的。
6楼2014-03-14 10:06:47
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kankan19858578

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wlw1002 at 2014-03-14 09:22:33
我们是这样做的
取0.2 mmol/L DPPH 2 mL于比色管中,加入2 mL不同浓度(0、0.5、1、2、5、10 mg/mL)的样品溶液,于室温下避光静置30 min,以70%乙醇水溶液作参比,在517 nm下测定吸光度,记为A0;以等量蒸馏水代替 ...

我用的溶剂是纯甲醇,是不是这个缘故啊。甲醇体系里面会不会不反应?
7楼2014-03-14 10:08:18
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wlw1002

铜虫 (小有名气)

A是什么颜色,是浅紫色,还是无色?B是无色吗
8楼2014-03-14 10:10:42
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kankan19858578

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wlw1002 at 2014-03-14 09:22:33
我们是这样做的
取0.2 mmol/L DPPH 2 mL于比色管中,加入2 mL不同浓度(0、0.5、1、2、5、10 mg/mL)的样品溶液,于室温下避光静置30 min,以70%乙醇水溶液作参比,在517 nm下测定吸光度,记为A0;以等量蒸馏水代替 ...

你这样做下来的最高清除率能达到多少?
9楼2014-03-14 10:12:05
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wlw1002

铜虫 (小有名气)

如果是A和B都接近无色,说明清除能力很强,你的方法没问题。
10楼2014-03-14 10:12:45
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