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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 做过ABTS自由基清除试验的请进 在线等
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yanglei8128

新虫 (小有名气)

[求助] 做过ABTS自由基清除试验的请进 在线等 已有5人参与

最近在做ABTS自由基清除试验，可是发现工作液的OD值一直在下降，这样试验就没法做下去了，不知各位有没有这种情况的发生，如果有，如何解决的，非常感谢！
我的做法如下：
储备液1：7 mM ABTS水溶液
储备液2: 4.9 mM 过硫酸钾水溶液
母液：将储备液1和2等体积混合，室温避光反应12-16h
工作液：将母液用pH 7.4的磷酸缓冲液稀释至OD734=0.7±0.02
以上是引用其它同学的发帖，相同的配制方法也遇到相同的问题，储备液稀释后一小时内吸光值就由0.685下降到0.432，这样就不能用了啊，急请做过的大侠帮帮忙！十分感谢！
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上善若水
1楼 2012-05-14 18:17:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qiaqia832

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by yanglei8128 at 2012-05-16 22:37:19:
恩 我可以参考下，就是不太了解这个避光怎么操作，在配置和稀释过程中都没法做到完全避光啊

棕色瓶装溶液，锡箔纸或者黑色袋子把试剂瓶外面包严实，当然，也不可能完全的避光，我测得时候实验室灯比较暗，只要你按照比较正规的方法配置，吸光值不会降低很多的，除非你的溶液被污染了，因为ABTS是个很好清除的自由基，加一点儿待测样品就能变成无色了，所以玻璃仪器得洗干净，尽量不要有抗氧化性物质残留什么的，取溶液的时候也要注意，实验不理想是多方面的，有时候是试剂的问题，有时候是操作问题，你具体分析依稀自己的原因吧。
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Alwayshave,alwayswill.@DK。http://weibo.com/1949078153/profile?topnav=1&wvr=5&user=1
18楼2012-05-16 22:47:51
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Moon8808

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-14 23:11:16
我的方法和你的有点不一样，过硫酸钾用的是2.45，工作液是用无水乙醇稀释的，我做出来的效果还可以。
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2楼2012-05-14 21:37:31
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qiaqia832

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanglei8128: 金币+1 2012-05-16 22:36:15
yanglei8128: 金币+2 2012-05-16 22:37:26
yanglei8128: 金币+2 2012-05-16 23:15:12
我是用无水乙醇配的两种溶液，等体积混合制备母液，然后用无水乙醇稀释，过程中一定要避光，我用了一天，变化不大
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Alwayshave,alwayswill.@DK。http://weibo.com/1949078153/profile?topnav=1&wvr=5&user=1
15楼2012-05-16 14:06:44
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江大reus

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的过硫酸钾是用的2.45的  稀释的话可以用磷酸缓冲液也可以用乙醇  主要是要注意避光 我一般用棕色瓶外面包层锡箔纸
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33楼2017-04-07 18:23:27
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普通回帖

Moon8808

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
yanglei8128: 金币+4 2012-05-15 13:51:49
补充一下，我的混合比例是1:1，另外，你做几组之后，就测一下abts的od值，校正一下，会好一些吧
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3楼2012-05-14 21:40:11
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xdz1978

至尊木虫 (文坛精英)

持之以恒！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 金币+1, 感谢关注 2012-05-14 23:11:28
yanglei8128: 金币+3 2012-05-15 13:57:52
这种试剂确实需要现配现用，且要低温避光保存
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一身正气，两袖清风，三餐温饱，四大皆空！
4楼2012-05-14 22:43:06
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wuyang828

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-05-15 09:02:53
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xiangjinle

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanglei8128: 金币+4 2012-05-15 14:01:07
sweety: 金币+1, 鼓励新虫应助 2012-05-15 14:16:57
这种自由基本身就很不稳定，吸光值降低是正常现象。所以，一定要现配现用，如果样品较多，中间可以重新校正下。
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6楼2012-05-15 09:35:21
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shenkeping

铁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
yanglei8128: 金币+1 2012-05-15 14:08:59
sweety: 金币-1, 应助指数-1, 无效应助 2012-05-15 14:17:33
我前几天也做了同样的实验，变化太快，不知道怎么解决
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7楼2012-05-15 13:55:42
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yanglei8128

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Moon8808 at 2012-05-14 21:40:11:
补充一下，我的混合比例是1:1，另外，你做几组之后，就测一下abts的od值，校正一下，会好一些吧

谢谢你的帮助，再请问一下，工作液一般都是用缓冲液稀释，您怎么用的无水乙醇呢？
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上善若水
8楼2012-05-15 13:56:56
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yanglei8128

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xdz1978 at 2012-05-14 22:43:06:
这种试剂确实需要现配现用，且要低温避光保存

谢谢你的回复，就是做几组样品，每组都要现配吗？
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上善若水
9楼2012-05-15 13:59:10
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yanglei8128

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wuyang828 at 2012-05-15 09:02:53:
现配现用，每次做之前稀释到吸光值0.7，这样也不麻烦的

非常感谢你的回复，今天试试这种方法
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上善若水
10楼2012-05-15 14:00:05
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