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yanglei8128

新虫 (小有名气)

[求助] 做过ABTS自由基清除试验的请进 在线等 已有5人参与

最近在做ABTS自由基清除试验,可是发现工作液的OD值一直在下降,这样试验就没法做下去了,不知各位有没有这种情况的发生,如果有,如何解决的,非常感谢!
我的做法如下:
储备液1:7 mM ABTS水溶液
储备液2: 4.9 mM 过硫酸钾水溶液
母液:将储备液1和2等体积混合,室温避光反应12-16h
工作液:将母液用pH 7.4的磷酸缓冲液稀释至OD734=0.7±0.02
以上是引用其它同学的发帖,相同的配制方法也遇到相同的问题,储备液稀释后一小时内吸光值就由0.685下降到0.432,这样就不能用了啊,急请做过的大侠帮帮忙!十分感谢!
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上善若水
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qiaqia832

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yanglei8128 at 2012-05-16 22:37:19:
恩 我可以参考下,就是不太了解这个避光怎么操作,在配置和稀释过程中都没法做到完全避光啊

棕色瓶装溶液,锡箔纸或者黑色袋子把试剂瓶外面包严实,当然,也不可能完全的避光,我测得时候实验室灯比较暗,只要你按照比较正规的方法配置,吸光值不会降低很多的,除非你的溶液被污染了,因为ABTS是个很好清除的自由基,加一点儿待测样品就能变成无色了,所以玻璃仪器得洗干净,尽量不要有抗氧化性物质残留什么的,取溶液的时候也要注意,实验不理想是多方面的,有时候是试剂的问题,有时候是操作问题,你具体分析依稀自己的原因吧。
Alwayshave,alwayswill.@DK。http://weibo.com/1949078153/profile?topnav=1&wvr=5&user=1
18楼2012-05-16 22:47:51
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Moon8808

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-14 23:11:16
我的方法和你的有点不一样,过硫酸钾用的是2.45,工作液是用无水乙醇稀释的,我做出来的效果还可以。
2楼2012-05-14 21:37:31
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qiaqia832

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yanglei8128: 金币+1 2012-05-16 22:36:15
yanglei8128: 金币+2 2012-05-16 22:37:26
yanglei8128: 金币+2 2012-05-16 23:15:12
我是用无水乙醇配的两种溶液,等体积混合制备母液,然后用无水乙醇稀释,过程中一定要避光,我用了一天,变化不大
Alwayshave,alwayswill.@DK。http://weibo.com/1949078153/profile?topnav=1&wvr=5&user=1
15楼2012-05-16 14:06:44
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江大reus

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的过硫酸钾是用的2.45的  稀释的话可以用磷酸缓冲液也可以用乙醇  主要是要注意避光 我一般用棕色瓶外面包层锡箔纸
33楼2017-04-07 18:23:27
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普通回帖

Moon8808

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
yanglei8128: 金币+4 2012-05-15 13:51:49
补充一下,我的混合比例是1:1,另外,你做几组之后,就测一下abts的od值,校正一下,会好一些吧
3楼2012-05-14 21:40:11
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xdz1978

至尊木虫 (文坛精英)

持之以恒!

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hsd3521: 金币+1, 感谢关注 2012-05-14 23:11:28
yanglei8128: 金币+3 2012-05-15 13:57:52
这种试剂确实需要现配现用,且要低温避光保存
一身正气,两袖清风,三餐温饱,四大皆空!
4楼2012-05-14 22:43:06
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wuyang828

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

5楼2012-05-15 09:02:53
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xiangjinle

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yanglei8128: 金币+4 2012-05-15 14:01:07
sweety: 金币+1, 鼓励新虫应助 2012-05-15 14:16:57
这种自由基本身就很不稳定,吸光值降低是正常现象。所以,一定要现配现用,如果样品较多,中间可以重新校正下。
6楼2012-05-15 09:35:21
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shenkeping

铁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
yanglei8128: 金币+1 2012-05-15 14:08:59
sweety: 金币-1, 应助指数-1, 无效应助 2012-05-15 14:17:33
我前几天也做了同样的实验,变化太快,不知道怎么解决
7楼2012-05-15 13:55:42
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yanglei8128

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Moon8808 at 2012-05-14 21:40:11:
补充一下,我的混合比例是1:1,另外,你做几组之后,就测一下abts的od值,校正一下,会好一些吧

谢谢你的帮助,再请问一下,工作液一般都是用缓冲液稀释,您怎么用的无水乙醇呢?
上善若水
8楼2012-05-15 13:56:56
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yanglei8128

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xdz1978 at 2012-05-14 22:43:06:
这种试剂确实需要现配现用,且要低温避光保存

谢谢你的回复,就是做几组样品,每组都要现配吗?
上善若水
9楼2012-05-15 13:59:10
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yanglei8128

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wuyang828 at 2012-05-15 09:02:53:
现配现用,每次做之前稀释到吸光值0.7,这样也不麻烦的

非常感谢你的回复,今天试试这种方法
上善若水
10楼2012-05-15 14:00:05
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