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不倒翁陈露

金虫 (小有名气)

budaoweng

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专业: 生物无机化学

[求助] 湿转转膜条件已有2人参与

目的蛋白是23KD的，电泳条件是：15%的分离胶，1.5mm的玻璃板（上样量较大100ug），先80V把胶压平，后110V，2h，从Marker的条带来看是很好的，
湿转法转膜，条件：250mA，冰上60---70min，用甲醇活化了的PVDF膜，湿转液都是新配置的，每次曝光的目的条带都不是很清楚，很浅，
是不是我的湿转条件有问题？还是别的方面操作不对呢？含泪求助啊

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为了遇见更好的自己，加油！

1楼 2014-03-05 09:12:21

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不倒翁陈露

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引用回帖:

3楼: Originally posted by yuweiguo138 at 2014-03-07 17:28:05
有没有延长曝光时间？爆的更久点。转膜的话23KD，你那个条件肯定转上去了，看看滤纸上有无marker，不要转过了。一抗的浓度摸索过吗？是不是太低了？如果有阳性对照，带个阳性对照的样本，看看是不是本身蛋白的表达量 ...

本身蛋白的表达量就低，一抗的浓度正在摸索中，很难作出很好的条带，不具有重复性，背景很深，目的条带很浅