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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 双向电泳，如何选择蛋白定量的方法？
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zmclk

银虫 (小有名气)

[求助] 双向电泳，如何选择蛋白定量的方法？ 已有2人参与

如图所示，用UTC裂解液提取蛋白，该用BSA定量还是BCA定量蛋白呢？
双向电泳，如何选择蛋白定量的方法？
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1楼 2014-02-26 16:08:37
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jiclong521

新虫 (初入文坛)
我们实验室就用的BSA
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2楼2014-02-26 20:32:44
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
都一样的吧，不过貌似BSA比较好

[ 发自小木虫客户端 ]
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青山不断，绿水长流
3楼2014-02-26 23:17:57
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2009jxncmeet

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用BSA要好些，BCA的会偏大
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潜移默化地不断追求科研真谛
4楼2014-02-27 09:34:17
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zmclk

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 2009jxncmeet at 2014-02-27 09:34:17
用BSA要好些，BCA的会偏大

如果有DTT，会干扰BSA，怎么办呢？
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5楼2014-02-27 21:44:59
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2009jxncmeet

金虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢补充 2014-03-01 10:12:17
引用回帖:
5楼: Originally posted by zmclk at 2014-02-27 21:44:59
如果有DTT，会干扰BSA，怎么办呢？...

你上面的裂解液中没有DTT啊，况且有的话只要小于1mM的话，也是影响可以忽略。
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潜移默化地不断追求科研真谛
6楼2014-03-01 09:35:22
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zmclk

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 2009jxncmeet at 2014-03-01 09:35:22
你上面的裂解液中没有DTT啊，况且有的话只要小于1mM的话，也是影响可以忽略。...

如果用这种裂解液，是不是就不能用BSA法定量？我现在在纠结用哪种裂解液，唉~~~~
                              最终浓度
尿素FW（60.06）          7M
硫脲FW（76.12）        2M
CHAPS                       4%(W/v)
IPG缓冲液                        2%（v/v）
DTT（FW154.2）        40mM
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7楼2014-03-03 14:22:44
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2009jxncmeet

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zmclk at 2014-03-03 14:22:44
如果用这种裂解液，是不是就不能用BSA法定量？我现在在纠结用哪种裂解液，唉~~~~
                              最终浓度
尿素FW（60.06）          7M
硫脲FW（76.12）        2M
CHAPS                       4%(W/v)
IPG缓冲液               ...

你最后的DTT 应该是Tris的含量吧？裂解液在配置的时候是不要加DTT的，只有在使用的时候加。
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潜移默化地不断追求科研真谛
8楼2014-03-05 08:36:45
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zmclk

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2009jxncmeet at 2014-03-05 08:36:45
你最后的DTT 应该是Tris的含量吧？裂解液在配置的时候是不要加DTT的，只有在使用的时候加。...

就是DTT的含量。是的，用的时候再加，这个是最终浓度。你觉得和上面的裂解液配方，哪种比较好？
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9楼2014-03-05 10:24:23
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