| 查看: 1587 | 回复: 11 | |||
seo.d_park木虫 (正式写手)
|
[求助]
关于Cloning的问题，求救啊~~已有5人参与
|
||
|
我在做的cloning， 我的几个mutant...Ligation,enzyme cutting 确认, sequencing, Protein expression这些都没有问题。 所以准备做Maxi prep来大量提取DNA。 但是问题就出在这儿。 之前的步骤一直是拿取的colony 在4ml LB broth培养(3ml培养，1ml做了Stock)后，Mini prep提取的DNA做的。 然后确定DNA没问题后，拿stock做 Maxi prep。 (stock是 菌液：DMSO=4:1 制作的 500ul,然后放入-80℃的freezer 冷冻保管。) 在做Maxi 时候（确认培养液浑浊后），取少量(3ml)又用restriction enzyme 切了一遍，发现没有之前(Colony提取的DNA) Insert band 明显(DNA量加到2ug才能隐约看到Insert band,有几个根本看不到，之前用1ug 就能看到明显的insert band，我所做的Insert size 是200~700bp，restriction enzyme 前后端一起切的,用的是takara的，1ug/1ug）。 然后继续确认了Protein expression，与之前一样用了1ug 进行了transfection,但是没有出现Band。 所以我又疑惑把Maxi prep提取的DNA切了一遍，insert这次根本切不掉了。 这到底是什么问题啊。。 不可能是在培养过程中变异或者在freezer里面变异了吧。。。 求解啊~~  上面的图是1ug cutting,下面的是2ug... colony cutting(下面的Band).jpg  stock cutting(下数第二个band).jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
关于cloning用的DNA polymerase，急~求助大侠们~~
已经有8人回复- 求助，cloning大侠 基础~
已经有4人回复
- 投稿COLLOIDS AND SURFACES B: BIOINTERFACES遇到个困惑的问题，紧急求救
已经有10人回复
- 求救一个关于物理化学的问题
已经有12人回复
- pEASY-T1 Cloning Kit 基因克隆相关问题
已经有5人回复
- 求救啊！！关于公务员学习经历断档的问题，，求救啊！！！
已经有9人回复
- 求救 一个积分问题
已经有3人回复
- PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！
已经有7人回复
- 平末端连接不上，求助
已经有21人回复
- 关于matlab线性规划 背包问题的 解法 求救呀~~方程知道 但不知道如何解答····
已经有4人回复
- 水杨醛与乙酰氯的反应 出问题了 各位大侠求救。。。。。
已经有18人回复
- 紧急求救 关于香港research proposal的问题
已经有7人回复
- 求救关于十水硫酸钠做相变材料的问题！！
已经有8人回复
- 谁做过pEASY-Blunt Cloning啊？谁做过平末端连接啊？
已经有7人回复
- 紧急求救：给小孩办理J2签证，填写DS160表碰到的几个问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢
已经有7人回复
- 【求助】有关MOMCl保护酚的问题求救
已经有7人回复
- 【求助/交流】Molecular Cloning: A Laboratory Manual 这本书大概多少钱（英文版的）
已经有13人回复
- 【求助】一个关于毛细管内凸凹液体的特性问题（求救！！！）
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题
已经有21人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】平末端必须去磷酸化吗
已经有6人回复
- 【求助】MS建模导入lammps问题求救
已经有14人回复
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-02-21 21:32:54
forrestgump
新虫 (著名写手)
- 应助: 118 (高中生)
- 金币: 2290.8
- 散金: 857
- 红花: 63
- 帖子: 2133
- 在线: 226小时
- 虫号: 367235
- 注册: 2007-05-10
- 专业: 动物资源与保护
3楼2014-02-21 22:16:36
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
5楼2014-02-22 11:29:53
意孤城_
金虫 (正式写手)
- 应助: 32 (小学生)
- 金币: 1223.8
- 散金: 506
- 红花: 9
- 帖子: 533
- 在线: 55.6小时
- 虫号: 1600188
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 生物材料
6楼2014-02-22 15:30:08
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7752.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 188.2小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
7楼2014-02-22 19:44:28
xujian568
至尊木虫 (著名写手)
Count XU
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 10690.8
- 红花: 7
- 帖子: 1316
- 在线: 560.9小时
- 虫号: 336444
- 注册: 2007-04-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
9楼2014-02-22 22:22:42
cs2951819
银虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 121.1
- 散金: 51
- 帖子: 55
- 在线: 64.8小时
- 虫号: 1199908
- 注册: 2011-02-07
- 性别: GG
- 专业: 食品加工技术
4楼2014-02-22 08:53:12
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
8楼2014-02-22 19:56:12
seo.d_park
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 6488.3
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 309
- 在线: 60.9小时
- 虫号: 2612814
- 注册: 2013-08-23
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2014-02-23 14:15:33