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seo.d_park木虫 (正式写手)
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我的Vector 和 Insert DNA 在用限制性内切酶切完后在0.8% agarose gel 上确认了size,切完后size没问题。 Ligation结束后 把 提纯的DNA在0.8%agarose gel上确认，size偏小。 我以为是Insert DNA 和 Vector 的问题，所以把Ligation结束的DNA 取少量用之前的 restriction enzyme又切了一遍，然后确认了size,切完后的size没问题，就是一进行Ligation 然后确认size 就偏小。。（本来应该在4.8kb左右，但是Band在4kb左右.) vector和 Insert DNA的 size没问题，就是Ligation结束后 比理论上的size(Vector size + Insert DNA size) 小，这到底是为什么啊？ 以下是我的5个sample Vector size:4679bp Insert size:225bp,675bp,516bp,720bp,390bp Ligation 结束后理论上应该是:4.8kb 5.3kb 5.1kb 5.3kb 5kb  cut.jpg  uncut.jpg  uncut &cut.jpg [ Last edited by seo.d_park on 2014-1-16 at 11:02 ] |
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【答案】应助回帖
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seo.d_park: 金币+10 2014-01-17 14:25:20
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首先，你点样的太多了。你这个可以点0.5的样混合，取2ul去跑样。 再者，样多了就亮，就会成块聚集在一起，本来不好分的带更看不出来了。 第三，这种情况我也碰到过，因为质粒提出来后有三种形态，不一定会怎样。 Ligation结束的DNA 取少量用之前的 restriction enzyme又切了一遍。 这种做法有不合理的地方，酶切验证最好换一种酶单酶切。 |
2楼2014-01-16 15:06:32
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