| 查看: 722 | 回复: 4 | |||
seo.d_park木虫 (正式写手)
|
[求助]
求助，cloning大侠 基础~ 已有3人参与
|
|
我的Vector 和 Insert DNA 在用限制性内切酶切完后在0.8% agarose gel 上确认了size,切完后size没问题。 Ligation结束后 把 提纯的DNA在0.8%agarose gel上确认，size偏小。 我以为是Insert DNA 和 Vector 的问题，所以把Ligation结束的DNA 取少量用之前的 restriction enzyme又切了一遍，然后确认了size,切完后的size没问题，就是一进行Ligation 然后确认size 就偏小。。（本来应该在4.8kb左右，但是Band在4kb左右.) vector和 Insert DNA的 size没问题，就是Ligation结束后 比理论上的size(Vector size + Insert DNA size) 小，这到底是为什么啊？ 以下是我的5个sample Vector size:4679bp Insert size:225bp,675bp,516bp,720bp,390bp Ligation 结束后理论上应该是:4.8kb 5.3kb 5.1kb 5.3kb 5kb  cut.jpg  uncut.jpg  uncut &cut.jpg [ Last edited by seo.d_park on 2014-1-16 at 11:02 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有189人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急求历届河南省事业单位考试公共基础知识真题及解析，谢谢各位大侠了啊！！！
已经有7人回复
- 如何克隆一个在小鼠、大鼠中序列已知，但在人未知的基因？
已经有11人回复
- Molecular microbial ecology manual电子版
已经有3人回复
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-17 12:48:50
seo.d_park: 金币+10 2014-01-17 14:25:20
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-17 12:48:50
seo.d_park: 金币+10 2014-01-17 14:25:20
|
首先，你点样的太多了。你这个可以点0.5的样混合，取2ul去跑样。 再者，样多了就亮，就会成块聚集在一起，本来不好分的带更看不出来了。 第三，这种情况我也碰到过，因为质粒提出来后有三种形态，不一定会怎样。 Ligation结束的DNA 取少量用之前的 restriction enzyme又切了一遍。 这种做法有不合理的地方，酶切验证最好换一种酶单酶切。 |
2楼2014-01-16 15:06:32
3楼2014-01-16 16:05:16
zhaozhibozhi
金虫 (正式写手)
- 应助: 112 (高中生)
- 金币: 1512.3
- 散金: 5
- 红花: 11
- 帖子: 480
- 在线: 444.9小时
- 虫号: 1763195
- 注册: 2012-04-18
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
4楼2014-01-17 08:36:19
5楼2014-01-18 14:19:18
20