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wanghf_6134

新虫 (初入文坛)

[求助] pEASY-T1 Cloning Kit 基因克隆相关问题

1.上回不小心用无菌水水配X-gal,发现不溶,又加了二甲基甲酰胺才把它溶了,这是唯一的补救措施了。但是,现在纠结要不要像IPTG一样,用0.22um的滤膜给它过滤(原来只有二甲基甲酰胺据说是不用的,但现在多了一个无菌水),这样做会不会把X-gal挡在外面?或者其他什么情况?
2.蓝白班培养,因为生长速度有些不同,能不能在冰箱里放一段时间组织它生长,它长出来的斑用掉,再放回恒温箱,还会再长吗?如果仅考虑到冰箱温度的问题,而不是时间。如果是时间,大概24个小时后,就不会长了吧?
3.用感受态trans1-t1 做克隆,培养基要调到多少呢?7.0?
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gyesang

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【答案】应助回帖

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wanghf_6134: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-06 15:51:24
1. X-gal按照你的配方,用不着过滤

2. 平板可以一直放培养箱16小时左右,然后挑菌落鉴定,菌落太小不要紧,你说的方法麻烦且不可取

3. Trans1-T1的培养基不用调pH
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2楼2013-11-06 01:53:58
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wanghf_6134

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 01:53:58
1. X-gal按照你的配方,用不着过滤

2. 平板可以一直放培养箱16小时左右,然后挑菌落鉴定,菌落太小不要紧,你说的方法麻烦且不可取

3. Trans1-T1的培养基不用调pH

2.不可取在什么地方?昨天挑错菌落了,我用比菌落大的直径孔去挑,同学说不可取的,会有杂菌,然后因为我把培养皿内又放回恒温箱了,36个小时后的斑还可以要吗?
3.不知是不是我没调ph的问题,12小时不长,16小时4个白班,20小时才出现10个白斑,1个蓝斑。挑了ph效果会不会好点?
3楼2013-11-06 08:38:30
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanghf_6134: 金币+3 2013-11-06 15:55:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanghf_6134 at 2013-11-06 08:38:30
2.不可取在什么地方?昨天挑错菌落了,我用比菌落大的直径孔去挑,同学说不可取的,会有杂菌,然后因为我把培养皿内又放回恒温箱了,36个小时后的斑还可以要吗?
3.不知是不是我没调ph的问题,12小时不长,16小时 ...

2. 反复放培养箱会有杂菌长出来,会很容易出现卫星菌落,你说用比菌落大的直径孔去挑,你同学说不可取,会有杂菌,但你已经做了,我认为影响不大,如果是杂菌的话,在抗性培养基里是长不起来的,36小时才长起来的,一般都不对,何况你用的是Trans1-T1感受态,这个菌株长的飞快,9小时就可以挑菌落了

3. LB培养基没有那么严格,白斑长的少不是平板的问题
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4楼2013-11-06 10:14:11
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wanghf_6134

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 10:14:11
2. 反复放培养箱会有杂菌长出来,会很容易出现卫星菌落,你说用比菌落大的直径孔去挑,你同学说不可取,会有杂菌,但你已经做了,我认为影响不大,如果是杂菌的话,在抗性培养基里是长不起来的,36小时才长起来的, ...

那36小时长出来的是杂菌吧?我原先以为杂菌都是全部分布才是杂菌的
5楼2013-11-06 13:09:22
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gyesang

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引用回帖:
5楼: Originally posted by wanghf_6134 at 2013-11-06 13:09:22
那36小时长出来的是杂菌吧?我原先以为杂菌都是全部分布才是杂菌的...

应该算是杂菌
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6楼2013-11-06 13:48:35
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