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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » pEASY-T1 Cloning Kit 基因克隆相关问题
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wanghf_6134

新虫 (初入文坛)

[求助] pEASY-T1 Cloning Kit 基因克隆相关问题

1.上回不小心用无菌水水配X-gal，发现不溶，又加了二甲基甲酰胺才把它溶了，这是唯一的补救措施了。但是，现在纠结要不要像IPTG一样，用0.22um的滤膜给它过滤（原来只有二甲基甲酰胺据说是不用的，但现在多了一个无菌水），这样做会不会把X-gal挡在外面？或者其他什么情况？
2.蓝白班培养，因为生长速度有些不同，能不能在冰箱里放一段时间组织它生长，它长出来的斑用掉，再放回恒温箱，还会再长吗？如果仅考虑到冰箱温度的问题，而不是时间。如果是时间，大概24个小时后，就不会长了吧？
3.用感受态trans1-t1 做克隆，培养基要调到多少呢？7.0？
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1楼 2013-11-05 19:34:35
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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wanghf_6134: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-06 15:51:24
1. X-gal按照你的配方，用不着过滤

2. 平板可以一直放培养箱16小时左右，然后挑菌落鉴定，菌落太小不要紧，你说的方法麻烦且不可取

3. Trans1-T1的培养基不用调pH
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2楼2013-11-06 01:53:58
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wanghf_6134

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 01:53:58
1. X-gal按照你的配方，用不着过滤

2. 平板可以一直放培养箱16小时左右，然后挑菌落鉴定，菌落太小不要紧，你说的方法麻烦且不可取

3. Trans1-T1的培养基不用调pH

2.不可取在什么地方？昨天挑错菌落了，我用比菌落大的直径孔去挑，同学说不可取的，会有杂菌，然后因为我把培养皿内又放回恒温箱了，36个小时后的斑还可以要吗？
3.不知是不是我没调ph的问题，12小时不长，16小时4个白班，20小时才出现10个白斑，1个蓝斑。挑了ph效果会不会好点？
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3楼2013-11-06 08:38:30
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanghf_6134: 金币+3 2013-11-06 15:55:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanghf_6134 at 2013-11-06 08:38:30
2.不可取在什么地方？昨天挑错菌落了，我用比菌落大的直径孔去挑，同学说不可取的，会有杂菌，然后因为我把培养皿内又放回恒温箱了，36个小时后的斑还可以要吗？
3.不知是不是我没调ph的问题，12小时不长，16小时 ...

2. 反复放培养箱会有杂菌长出来，会很容易出现卫星菌落，你说用比菌落大的直径孔去挑，你同学说不可取，会有杂菌，但你已经做了，我认为影响不大，如果是杂菌的话，在抗性培养基里是长不起来的，36小时才长起来的，一般都不对，何况你用的是Trans1-T1感受态，这个菌株长的飞快，9小时就可以挑菌落了

3. LB培养基没有那么严格，白斑长的少不是平板的问题
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4楼2013-11-06 10:14:11
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wanghf_6134

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 10:14:11
2. 反复放培养箱会有杂菌长出来，会很容易出现卫星菌落，你说用比菌落大的直径孔去挑，你同学说不可取，会有杂菌，但你已经做了，我认为影响不大，如果是杂菌的话，在抗性培养基里是长不起来的，36小时才长起来的， ...

那36小时长出来的是杂菌吧？我原先以为杂菌都是全部分布才是杂菌的
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5楼2013-11-06 13:09:22
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gyesang

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引用回帖:
5楼: Originally posted by wanghf_6134 at 2013-11-06 13:09:22
那36小时长出来的是杂菌吧？我原先以为杂菌都是全部分布才是杂菌的...

应该算是杂菌
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6楼2013-11-06 13:48:35
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