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求助如何将蛋白和游离荧光配体分离 已有2人参与
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用荧光配体标记蛋白，现在想要将溶于去污剂溶液的蛋白和荧光配体分离开来，请问使用哪种简便便宜的分离或过滤方式能达到这种效果？跪求 ，万分感谢各位的帮助与关注！ [ Last edited by farther1990 on 2014-2-12 at 10:23 ] |
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除去过量小分子除了离子交换柱就是透析,要么然HPLC或者ziptip之类的吸附材料. 你可以用些小点的离子交换柱嘛,比如这种:http://www.genaxxon.net/pdf/CentriSep.pdf 只有0.5ml体积, 就在2ml EP管里做. 10分钟就完成交换. 如果就是不愿意用离子交换那可以从蛋白的tag入手,比如你蛋白上有his-tag那你就用一点点镍柱,20-40ul就够,在离心管里做个pulldown. 把挂柱的蛋白洗几次,然后再用咪唑洗脱下来. 但还是要注意的是如果你的配体不是共价键结合,在除去过量配体的同时,配体就会解离下来. 非共价键结合的,除非Kd非常小, 比如biotin-streptavidin |
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