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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求助如何将蛋白和游离荧光配体分离
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farther1990

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助如何将蛋白和游离荧光配体分离 已有2人参与

用荧光配体标记蛋白，现在想要将溶于去污剂溶液的蛋白和荧光配体分离开来，请问使用哪种简便便宜的分离或过滤方式能达到这种效果？跪求，万分感谢各位的帮助与关注！

[ Last edited by farther1990 on 2014-2-12 at 10:23 ]
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不以物喜，不以己悲
1楼 2014-02-12 09:47:58
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-13 12:26:45
荧光和蛋白是共价键结合的吗? 如果是就用离子交换柱 G-25之类的纯化, 超滤肯定除不干净
但是如果不是共价键结合, 你在除去过量荧光配体的同时, 就会导致配体和蛋白解离. 因为本质上就是一个平衡, 如果你的配体浓度小于或接近Kd, 即便过量也会解离下来
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
8楼2014-02-12 22:55:33
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wangdunzju

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-12 13:40:45
如果配体和蛋白的分子量差距大的话，可以考虑用凝胶电泳分离，然后切胶回收。
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2楼2014-02-12 10:29:56
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangdunzju at 2014-02-12 10:29:56
如果配体和蛋白的分子量差距大的话，可以考虑用凝胶电泳分离，然后切胶回收。

非常感谢！因为我想测定游离的荧光配体浓度，如果是跑胶的话就不能达到这个效果。我尝试使用过10kD超滤的方法，也不能将游离配体完全离心收集。
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不以物喜，不以己悲
3楼2014-02-12 10:35:41
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wangdunzju

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-13 12:26:37
如果你的目的只是测荧光配体的浓度，查查看是不是有检测荧光信号的方法，直接检测样品中荧光物质的浓度，然后换算成配体的浓度。仅供参考。
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4楼2014-02-12 15:15:12
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