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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自杀载体问题
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libinaizuqiu

新虫 (初入文坛)

[求助] 自杀载体问题 已有2人参与

自杀载体通过同源臂与基因组发生同源重组从而整合在基因组上，我想请问是整个质粒都整合上去了吗？如果是的话，整合的位置在哪？是不是只破坏了目的基因，会不会影响基因组上其他基因的表达？
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1楼 2014-01-12 09:26:53
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-13 10:37:31
gyesang: 回帖置顶 2014-01-13 16:56:32
按lz实验，应该是同源臂和质粒都整合到基因组上，需要经过二次重组筛选（依质粒特性，如SacB基因或温敏原件）使自杀质粒丢失，再经过验证后获得突变体。

看个示意图：http://pan.baidu.com/s/1mgBIOA0
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做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2014-01-13 08:29:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-12 16:24:40
如果你做的是双交换同源重组，只有同源臂之间的序列整合到染色体上了。如果你只设计一段同源序列，即单交换，这个质粒都会整合到染色体上。整合的位置是你设计的同源序列的位置。是否影响基因组其他基因的表达，需要实验证明。因为有些基因的编码区可能存在对其他基因的调控元件。
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2楼2014-01-12 11:15:57
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libinaizuqiu

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-12 11:15:57
如果你做的是双交换同源重组，只有同源臂之间的序列整合到染色体上了。如果你只设计一段同源序列，即单交换，这个质粒都会整合到染色体上。整合的位置是你设计的同源序列的位置。是否影响基因组其他基因的表达，需要 ...

只有同源臂之间的序列整合到染色体上了是什么意思？我质粒上的同源臂是目的基因的上臂和下臂，即两个同源臂连到质粒上
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3楼2014-01-12 12:33:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by libinaizuqiu at 2014-01-12 12:33:15
只有同源臂之间的序列整合到染色体上了是什么意思？我质粒上的同源臂是目的基因的上臂和下臂，即两个同源臂连到质粒上...

有什么疑问吗？只有同源臂之间的序列会整合到染色体，通过同源重组。
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4楼2014-01-12 17:14:27
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libinaizuqiu

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-01-13 08:29:54
按lz实验，应该是同源臂和质粒都整合到基因组上，需要经过二次重组筛选（依质粒特性，如SacB基因或温敏原件）使自杀质粒丢失，再经过验证后获得突变体。

看个示意图：http://pan.baidu.com/s/1mgBIOA0

太感谢了，我用的就是这个原理，不过我做了几次二次重组了，得到的全是野生型，我想请问你们二次重组得到突变体的效率高吗？
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6楼2014-01-13 16:15:11
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by libinaizuqiu at 2014-01-13 16:15:11
太感谢了，我用的就是这个原理，不过我做了几次二次重组了，得到的全是野生型，我想请问你们二次重组得到突变体的效率高吗？...

一般我随机选4个单菌落，会有1-2个是突变体；全是野生型的只遇到过一次。
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做一个阳光、开朗的小和尚
7楼2014-01-14 09:16:09
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libinaizuqiu

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-01-14 09:16:09
一般我随机选4个单菌落，会有1-2个是突变体；全是野生型的只遇到过一次。...

你们的效率真高，我们这个菌太难做了，前一步载体导入受体菌，你们用的三亲结合还是电机转化？
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8楼2014-01-14 09:37:24
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by libinaizuqiu at 2014-01-14 09:37:24
你们的效率真高，我们这个菌太难做了，前一步载体导入受体菌，你们用的三亲结合还是电机转化？...

双亲接合，E. coli S17-1 λpir
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做一个阳光、开朗的小和尚
9楼2014-01-14 14:15:45
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libinaizuqiu

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-01-14 14:15:45
双亲接合，E. coli S17-1 λpir...

E. coli S17-1 λpir  是什么？求教
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10楼2014-01-14 15:40:22
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