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酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。已有4人参与
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这是我的PCR验证酵母基因敲除（方法就是常用的同源重组法，醋酸锂转化）泳道1出现的是从pUG6扩增disruption cassette 的一对引物，2-5泳道是A-B，6-9泳道是C-D，10-13泳道是A-D，（其中A、D是目的基因两侧的引物，B、C是目的基因内部的引物，B-M、C-M是marker内部的引物）不过，A、B-M和C-M、D并没有条带，所有样品都是用酵母菌液（冻融处理）作为模版。 我的问题是，我的A-D条带大小说明目的基因还在，且A-B，C-D的条带也说明了这点，但是为什么我的泳道1还有大小与我的disruption cassette 相同的条带呢？而且我今天做了个disruptionF，B-M和C-M，disruptionR两对引物，都有大小与预期相同的条带。说明disruption cassette 已经在酵母细胞中了。。。没有发生同源重组？ 各位分析一下什么情况……  yeast2 编辑.jpg |
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18楼2019-08-05 20:53:58