应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
52/1返回列表
查看: 4739  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。 已有4人参与

这是我的PCR验证酵母基因敲除（方法就是常用的同源重组法，醋酸锂转化）泳道1出现的是从pUG6扩增disruption cassette 的一对引物，2-5泳道是A-B，6-9泳道是C-D，10-13泳道是A-D，（其中A、D是目的基因两侧的引物，B、C是目的基因内部的引物，B-M、C-M是marker内部的引物）不过，A、B-M和C-M、D并没有条带，所有样品都是用酵母菌液（冻融处理）作为模版。
我的问题是，我的A-D条带大小说明目的基因还在，且A-B，C-D的条带也说明了这点，但是为什么我的泳道1还有大小与我的disruption cassette 相同的条带呢？而且我今天做了个disruptionF，B-M和C-M，disruptionR两对引物，都有大小与预期相同的条带。说明disruption cassette 已经在酵母细胞中了。。。没有发生同源重组？
各位分析一下什么情况……
酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
yeast2 编辑.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
我不会！
1楼 2014-01-07 20:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

J1663141418

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问解决了吗？PCR验证阳性克隆快要疯掉了
赞一下 回复此楼
18楼2019-08-05 20:53:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

三蛰

铜虫 (小有名气)
不要沉掉……………………
赞一下 回复此楼
我不会！
2楼2014-01-07 23:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)
不要沉掉……千万！有做过的望不吝赐教。。。
赞一下 回复此楼
我不会！
3楼2014-01-08 09:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spirit87

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:23:21
三蛰: 金币+2, ★有帮助 2014-01-12 21:47:39
你想过没有酵母也会存在二倍体的问题，如果只敲出了一份基因，而另外一份存在的话就这样。我们经常遇到类似情况
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-10 19:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:22 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 01:14 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 01:04 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 00:53 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 00:31 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-29 22:27 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭