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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长片段的PCR
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bingdong05

银虫 (正式写手)

[求助] 长片段的PCR 已有3人参与

最近想做一个长片段PCR，约100多kb，不知道从何着手（包括pcr及连接，转化等），望知道的虫友不吝赐教，多谢！
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1楼 2014-01-03 12:25:34
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
和楼主一块学习 坐等解答
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生命不息奋斗不止
2楼2014-01-03 12:41:08
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
敢问楼主从哪弄的这么长序列。。。一般我们做的东西到了一个质粒上15kb就算组装有难度了。。
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3楼2014-01-03 16:02:05
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bingdong05

银虫 (正式写手)
源自人的一段基因
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4楼2014-01-03 16:58:43
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Biohydrogen

金虫 (正式写手)
建议分段做

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-01-03 19:17:46
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:26:17
bingdong05: 金币+1 2014-01-06 16:36:09
分段吧 100k 没有酶可以handle的。
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借你一生好不好
6楼2014-01-03 20:16:11
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:26:27
bingdong05: 金币+1 2014-01-06 16:36:02
你的这100kb是基因组序列还是CDS序列啊，如果是CDS序列，那真的太长了。建议你还是先确定一下你的序列属于那种形式。
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7楼2014-01-03 21:24:34
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bingdong05

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 不叶珏 at 2014-01-03 20:16:11
分段吧 100k 没有酶可以handle的。

分段的话除了酶切连接外，还有其他方法吗
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8楼2014-01-06 16:35:50
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bingdong05

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 20083630zhan at 2014-01-03 21:24:34
你的这100kb是基因组序列还是CDS序列啊，如果是CDS序列，那真的太长了。建议你还是先确定一下你的序列属于那种形式。

分段的话除了酶切，还有其他链接方法吗，没切的话，不一定有合适的酶切位点啊
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9楼2014-01-06 16:36:44
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bingdong05: 金币+5 2014-05-27 07:56:10
引用回帖:
9楼: Originally posted by bingdong05 at 2014-01-06 16:36:44
分段的话除了酶切，还有其他链接方法吗，没切的话，不一定有合适的酶切位点啊...

可以通过重叠衍伸PCR，不过需要做多次，中间可定有突变，在这就是通过自身构建质粒，
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10楼2014-01-06 19:28:18
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