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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做细菌的双重荧光pcr
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a3200649

铜虫 (正式写手)

[求助] 做细菌的双重荧光pcr 已有1人参与

请问做2种细菌的双重荧光pcr，我用的是菌种，必须要制备标准品吗（进行PCR扩增，并将目的片段克隆于pMD18-T，
构建重组质粒，提取质粒进行PCR分析和测序验证）？必须要这一步吗？

如果不制备标准品，直接提取菌种DNA，然后并利用OD260nm/OD280nm比值来确定DNA的纯度，然后进行梯度稀释，测检测限，这样可以吗？
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1楼 2014-01-02 09:14:51
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a3200649

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 10:30:21
如果引探是能用的，最好还是拿公认的那种引探来做个对比，以证明效果。

谢谢，再请教你3个问题，1.我用荧光pcr设计的引探中的引物来作为标准品前期的pcr扩增的引物是不是不可以啊（听老师说是荧光pcr的引物扩增出来的DNA要比普通的引物pcr的要短） 需要从新设计一段普通pcr的引物
2.这个实验阳性标准品大约需要多少时间做的完啊（从扩增，到测序得到标准品）？我是新手，不太会！
3.我可不可以用其他文献的针对细菌某特异性基因的引物（例如 李斯特菌的hly特异性基因）来设计作为我该细菌普通pcr的引物呢？
谢谢
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7楼2014-01-02 10:38:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
a3200649: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-01-02 09:37:52
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-02 13:36:02
看看你的目的是什么，如果只是看看荧光的，有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的，没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个？起码有个对照。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2014-01-02 09:30:51
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a3200649

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:30:51
看看你的目的是什么，如果只是看看荧光的，有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的，没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个？起码有个对照。

明白！谢谢
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3楼2014-01-02 09:37:42
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a3200649

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:30:51
看看你的目的是什么，如果只是看看荧光的，有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的，没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个？起码有个对照。

我说的已知需要检测的菌种可不可以算是标准品呢？
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4楼2014-01-02 09:40:23
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