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a3200649

铜虫 (正式写手)

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[求助] 做细菌的双重荧光pcr 已有1人参与

请问做2种细菌的双重荧光pcr，我用的是菌种，必须要制备标准品吗（进行PCR扩增，并将目的片段克隆于pMD18-T，
构建重组质粒，提取质粒进行PCR分析和测序验证）？必须要这一步吗？

如果不制备标准品，直接提取菌种DNA，然后并利用OD260nm/OD280nm比值来确定DNA的纯度，然后进行梯度稀释，测检测限，这样可以吗？

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希望大家多多交流

1楼 2014-01-02 09:14:51

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a3200649

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引用回帖:

6楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 10:30:21
如果引探是能用的，最好还是拿公认的那种引探来做个对比，以证明效果。

谢谢，再请教你3个问题，1.我用荧光pcr设计的引探中的引物来作为标准品前期的pcr扩增的引物是不是不可以啊（听老师说是荧光pcr的引物扩增出来的DNA要比普通的引物pcr的要短）需要从新设计一段普通pcr的引物
2.这个实验阳性标准品大约需要多少时间做的完啊（从扩增，到测序得到标准品）？我是新手，不太会！
3.我可不可以用其他文献的针对细菌某特异性基因的引物（例如李斯特菌的hly特异性基因）来设计作为我该细菌普通pcr的引物呢？
谢谢