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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA提取相关的问题
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xinr2010

金虫 (小有名气)

[求助] DNA提取相关的问题 已有3人参与

试剂盒提取组织DNA，最后一步要换新管后再用TE收集DNA。忘记换新管了，直接在原来的离心管里用TE收集了，这种情况该怎么处理啊？
急急急！！~！谢谢了！
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1楼 2014-01-01 15:55:50
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-02 08:35:41
用 异丙醇沉淀一I下
然后再重新拿个管子，
洗涤2次，
换个管子，
洗脱收集
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2楼2014-01-01 17:01:56
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-02 08:35:46
xinr2010: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢你, 学了不少东西! 2014-01-05 14:13:17
旧管子里应该主要是盐离子和酒精污染，个人感觉洗脱下来的DNA直接做一般的PCR模板是不会有影响的，因为一般的PCR要稀释模板，且反应体系中模板量加的很少，基本可以忽略残留的酒精及盐离子对酶活的影响，如果就是为了扩增做模板的话，可以直接用
如果不放心，可以用三楼的方式沉淀下来，就是用2.5倍体积的酒精或者等体积的异丙醇沉淀DNA，然后高速离心收集DNA，用70%的酒精洗涤沉淀，再次离心（洗涤将导致DNA沉淀悬浮，再次离心可避免将DNA沉淀倒出），弃上清，室温放置若干分钟，待酒精挥发后直接加适量水溶解就可以了！
不用把溶解的DNA溶液重新加到柱子里洗涤、洗脱。因为柱子吸附DNA是有条件的，高盐低PH条件下柱子吸附DNA，相反的条件DNA就被洗脱下来，如果直接这样再上柱子，吸附效果不好，产量可能会很低！楼主可以试试！
祝楼主成功！
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
3楼2014-01-01 19:40:36
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wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-02 08:35:50
可以将提取的DNA测下浓度和纯度，不行的话重新提也很快的。
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4楼2014-01-01 19:54:46
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