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xinr2010

金虫 (小有名气)

[求助] DNA提取相关的问题 已有3人参与

试剂盒提取组织DNA,最后一步要换新管后再用TE收集DNA。忘记换新管了,直接在原来的离心管里用TE收集了,这种情况该怎么处理啊?
急急急!!~!谢谢了!
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-02 08:35:41
用 异丙醇沉淀一I下
然后再重新拿个管子,
洗涤2次,
换个管子,
洗脱收集
2楼2014-01-01 17:01:56
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-02 08:35:46
xinr2010: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢你, 学了不少东西! 2014-01-05 14:13:17
旧管子里应该主要是盐离子和酒精污染,个人感觉洗脱下来的DNA直接做一般的PCR模板是不会有影响的,因为一般的PCR要稀释模板,且反应体系中模板量加的很少,基本可以忽略残留的酒精及盐离子对酶活的影响,如果就是为了扩增做模板的话,可以直接用
如果不放心,可以用三楼的方式沉淀下来,就是用2.5倍体积的酒精或者等体积的异丙醇沉淀DNA,然后高速离心收集DNA,用70%的酒精洗涤沉淀,再次离心(洗涤将导致DNA沉淀悬浮,再次离心可避免将DNA沉淀倒出),弃上清,室温放置若干分钟,待酒精挥发后直接加适量水溶解就可以了!
不用把溶解的DNA溶液重新加到柱子里洗涤、洗脱。因为柱子吸附DNA是有条件的,高盐低PH条件下柱子吸附DNA,相反的条件DNA就被洗脱下来,如果直接这样再上柱子,吸附效果不好,产量可能会很低!楼主可以试试!
祝楼主成功!
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
3楼2014-01-01 19:40:36
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wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-02 08:35:50
可以将提取的DNA测下浓度和纯度,不行的话重新提也很快的。
4楼2014-01-01 19:54:46
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