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ELISA 空白值高
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ELISA分析 采用间接ELISA检测抗血清效价。 用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸盐缓冲液将纯化的重组蛋白稀释为8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶标板, 每孔100μL, 4℃包被过夜。次日每孔加入100μL 5%的山羊血清封闭液, 37℃封闭2h后, 用PBST洗涤3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀释的羊抗血清100μL, 空白对照为兔抗血清稀释液( BSA+PBS) , 37℃孵育1 h后, 同上洗涤3次。再次每孔加入100μL HRP标记的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗涤3次。接下来每孔加入100μL TMB显色液, 37℃避光反应15 min后, 每孔再加入50μL 硫酸终止液。最后, 在酶标仪上测450 nm下的OD值。 但是 空白值离奇的高 很不正常 下面是我三次做的，求高手指点一下 红色部分是空白值 做了三次预试 求指导  预试1.png  预试2.png  预试3.png |
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