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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] ELISA 空白值高

ELISA分析
采用间接ELISA检测抗血清效价。
用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸盐缓冲液将纯化的重组蛋白稀释为8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶标板, 每孔100μL, 4℃包被过夜。次日每孔加入100μL 5%的山羊血清封闭液, 37℃封闭2h后, 用PBST洗涤3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀释的羊抗血清100μL, 空白对照为兔抗血清稀释液( BSA+PBS) , 37℃孵育1 h后, 同上洗涤3次。再次每孔加入100μL HRP标记的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗涤3次。接下来每孔加入100μL TMB显色液, 37℃避光反应15 min后, 每孔再加入50μL 硫酸终止液。最后, 在酶标仪上测450 nm下的OD值。
但是  空白值离奇的高 很不正常 下面是我三次做的,求高手指点一下  
红色部分是空白值
做了三次预试
求指导ELISA 空白值高
预试1.png


ELISA 空白值高-1
预试2.png


ELISA 空白值高-2
预试3.png
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ljj0720

银虫 (正式写手)

没有人回答啊 高手们 解答一下嘛  万分感谢啊
2楼2014-01-04 10:54:46
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