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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 求助：HPLC标品和样品在相同的出峰时间出来了两个峰
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沐夜精灵

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：HPLC标品和样品在相同的出峰时间出来了两个峰已有5人参与

我使用高效液相分析谷氨酸的标品和样品，结果发现在相同的出峰时间出来了两个峰。如图1图2所示，出峰时间约1min到2min。
衍生化试剂是异硫氰酸苯酯，分析的样品是谷氨酸。
衍生化过程如下

样品衍生化
取100微升样品液，用0.1mol/L的盐酸定容到10mL，在离心管中分别加入500微升稀释后的样品液，250微升的异硫氰酸苯酯溶液，250微升三乙胺溶液，震荡混匀，放入柱温箱中恒温1个小时。1小时后再加入1mL正己烷，震荡混匀，放入柱温箱中10min。取下清液，过滤膜，进样。

求助大家为什么我的谷氨酸标品和样品有俩峰呢？
求助：HPLC标品和样品在相同的出峰时间出来了两个峰
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求助：HPLC标品和样品在相同的出峰时间出来了两个峰-1
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1楼2013-12-30 16:34:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
release53: 金币+1, 感谢应助 2013-12-30 18:50:41
很简单，将衍生试剂异硫氰酸苯酯溶液，或者三乙胺进样，看看出峰位置，确定是否来自于它们的干扰，如果不是，可能是氨基酸分解、异构、杂质等各种可能性
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3楼2013-12-30 16:46:53
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organicsuper

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

请不要用塑料离心管配制样品,请用干净的玻璃进样瓶.
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17楼2017-01-03 08:56:02
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前做过么？关键你这个东西都处在溶剂峰位置，甚至比溶剂峰出来的很早，是溶剂还是衍生化试剂里的东西还不知道呢
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悲催的研发！
2楼2013-12-30 16:39:07
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 沐夜精灵 at 2013-12-30 16:57:12
做过一个空白，不加样品，其他的衍生化试剂之类的都一样，在1-2min时候没有任何峰，在15-20min出现了峰，也就是说衍生化试剂的峰应该是15-20min时候的峰了...

这个倒是有可能，那就考虑标准的变化，另外，系统峰也要考虑进去，主要是看光谱图
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7楼2013-12-30 17:32:34
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 沐夜精灵 at 2013-12-30 17:54:03
我在想是不是衍生化过程谷氨酸发生了变化，衍生化试剂用的是异硫氰酸苯酯，我先把样品溶于0.1M的盐酸，然后进行衍生化的。...

可以试试  衍生不完全的情况，一个是谷氨酸衍生物，一个是谷氨酸本身
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9楼2013-12-30 20:13:04
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xfeng117

金虫 (小有名气)
那你试试不用正己烷，用流动相溶你的样品看看
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13楼2014-01-06 13:43:06
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zhangh62

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

请调整流动相的比例，确保被测组分吸收峰的保留时间在4分钟以后，以免与干扰物质峰重叠而无法做出正确判断！
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治学不渝，荣辱不惊
14楼2014-01-06 18:28:18
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tagzhh

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我最近测软骨藻酸的时候也碰到了这个问题，软骨藻酸是谷氨酸的类似物嘛，最后才知道是色氨酸的干扰。试试调pH吧
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15楼2014-02-22 20:39:22
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普通回帖

沐夜精灵

新虫 (初入文坛)
做过一个空白，不加样品，其他的衍生化试剂之类的都一样，在1-2min时候没有任何峰，在15-20min出现了峰，也就是说衍生化试剂的峰应该是15-20min时候的峰了
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4楼2013-12-30 16:56:59
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沐夜精灵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wyy080214 at 2013-12-30 16:46:53
很简单，将衍生试剂异硫氰酸苯酯溶液，或者三乙胺进样，看看出峰位置，确定是否来自于它们的干扰，如果不是，可能是氨基酸分解、异构、杂质等各种可能性

做过一个空白，不加样品，其他的衍生化试剂之类的都一样，在1-2min时候没有任何峰，在15-20min出现了峰，也就是说衍生化试剂的峰应该是15-20min时候的峰了
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5楼2013-12-30 16:57:12
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沐夜精灵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by e_liang369 at 2013-12-30 16:39:07
以前做过么？关键你这个东西都处在溶剂峰位置，甚至比溶剂峰出来的很早，是溶剂还是衍生化试剂里的东西还不知道呢

做了空白对照，不是衍生化试剂里面的
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6楼2013-12-30 16:59:27
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沐夜精灵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wyy080214 at 2013-12-30 17:32:34
这个倒是有可能，那就考虑标准的变化，另外，系统峰也要考虑进去，主要是看光谱图...

我在想是不是衍生化过程谷氨酸发生了变化，衍生化试剂用的是异硫氰酸苯酯，我先把样品溶于0.1M的盐酸，然后进行衍生化的。
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8楼2013-12-30 17:54:03
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沐夜精灵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wyy080214 at 2013-12-30 20:13:04
可以试试  衍生不完全的情况，一个是谷氨酸衍生物，一个是谷氨酸本身...

因为异硫氰酸苯酯衍生化是在254nm波长检测，刚才我去测了一下，谷氨酸在254nm波长没有吸收，衍生化试剂有很强的吸收峰。也就是说如果没有衍生化完全的话谷氨酸本身在光谱图上面是不显示的。
会不会是因为谷氨酸在衍生化过程中出现了问题？
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10楼2013-12-30 23:19:22
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