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未知菌DNA怎么提都提不出来。。。
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忆雨悟烟
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未知菌DNA怎么提都提不出来。。。
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我现在在做一株未知菌名的菌,怀疑是古菌。但是DNA怎么都提不出来,用酚氯仿手提的,有大肠杆菌作为阳性对照,大肠杆菌能出来条带,但是那个菌怎么都提不出来,该怎么提啊!!求助!
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1楼
2013-12-18 17:15:47
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不建议手提。
方法一:如果这种菌能长成菌落 ,你就用宝生物的这个试剂盒来提一下(Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR),这个很便宜。
方法二:如果这个试剂盒不可以的话,你就用德国QIAGEN的试剂盒,这个大约1500,有点贵。
这些应该没有问题,你试试吧。
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挥霍不起青春
2楼
2013-12-18 21:29:46
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2013-12-19 09:07:44
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用CTAB提提试试,溶菌酶反应2个小时,蛋白酶过夜反应试试,我们实验室一直都是这么提,效果还是挺不错的
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前方总有更多挑战,战胜恐惧,勇往向前,加油~~~~
4楼
2013-12-19 09:31:53
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cicelyzh
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一般提不出核酸多半是因为破碎不好。未知的菌的细胞壁成分可能比较复杂,比大肠杆菌难破的物种有的是。用破不同生物细胞壁的方法都试试,祝成功。
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5楼
2013-12-19 10:12:33
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忆雨悟烟
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:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-12-19 10:12:33
一般提不出核酸多半是因为破碎不好。未知的菌的细胞壁成分可能比较复杂,比大肠杆菌难破的物种有的是。用破不同生物细胞壁的方法都试试,祝成功。
可是我用了石英砂,溶菌酶处理了都不行怎么办?
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相信我们坚持就会有美好的明天
6楼
2013-12-19 10:53:18
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用PCR啊!这不是最简单可靠的方法嘛!
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7楼
2013-12-19 14:26:04
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cicelyzh
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忆雨悟烟
at 2013-12-19 10:53:18
可是我用了石英砂,溶菌酶处理了都不行怎么办?...
试试用酚加热。
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8楼
2013-12-19 15:46:31
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试用一下OMEGA的试剂盒,这种的效果要好点,多试几次,如果是古菌,那就挺难的。
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轻描淡写,浓墨重彩。
9楼
2013-12-19 18:32:41
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