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[交流]
关于大质粒提取（ＤＮＡ提取）
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我查询到一篇文献，里面有几个个步骤， １.异丙醇沉淀后，沉淀溶解在ＴＥ中， ２.用５Ｍ氯化钠混匀，离心上清转移到一个新管中， ３.再次异丙醇沉淀，离心沉淀溶解在ＴＥ中， ４.用９Ｍ氯化锂静置后离心上清转移到新管中， ５.再次用异丙醇沉淀。 求解释个步骤作用，和目的。 |
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biodai质粒提取可以参考： 请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇 取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5 min，彻底弃除上清。 ↓ 加入20mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。 ↓ 加入2mL溶液I和40μL溶液B，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。 ↓ 加入4mL溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合） 加入3mL溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和） ↓ 10000rpm 4℃离心15min，小心吸出上清，轻移至新的20mL离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮） ↓ 加入6mL异丙醇，充分混匀，室温放置10min。 ↓ 10000rpm室温离心15min，小心吸弃上清，将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余的液体。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮） ↓ 加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清。 ↓ 加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清，倒置于干燥的吸水纸上2min。 ↓ 将离心管敞口室温放置5min，晾干沉淀。 ↓ 加入100μL溶液IV，温和震荡2min，使沉淀完全溶解。 |
2楼2020-04-17 15:16:30
