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371522029

金虫 (正式写手)


[交流] 关于大质粒提取(DNA提取)

我查询到一篇文献,里面有几个个步骤,
1.异丙醇沉淀后,沉淀溶解在TE中,
2.用5M氯化钠混匀,离心上清转移到一个新管中,
3.再次异丙醇沉淀,离心沉淀溶解在TE中,
4.用9M氯化锂静置后离心上清转移到新管中,
5.再次用异丙醇沉淀。

求解释个步骤作用,和目的。
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
biodai质粒提取可以参考:
请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇
取50mL菌液,置于50mL离心管中,4000rpm 4℃离心5 min,彻底弃除上清。

加入20mL溶液A,充分振荡2min,使菌体充分悬浮,确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min,彻底弃除上清。

加入2mL溶液I和40μL溶液B,充分振荡2min,使菌体充分悬浮,确保无絮块存在。

加入4mL溶液II,盖紧管盖,轻轻颠倒混匀6次,注意整个管子的内表面均需与溶液II接触,室温放置至溶液清亮。(一般为4-5min,如5min后溶液未变清亮,说明细菌过多,应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和,不要剧烈混合)
加入3mL溶液III,盖紧管盖,立即轻轻颠倒混匀8次,4℃放置5min。(此步注意要尽快混匀,但手法要温和)

10000rpm 4℃离心15min,小心吸出上清,轻移至新的20mL离心管。(应在离心机自动停转后取出离心管,以免沉淀悬浮)

加入6mL异丙醇,充分混匀,室温放置10min。

10000rpm室温离心15min,小心吸弃上清,将离心管倒置于吸水纸上,吸去残余的液体。(应在离心机自动停转后取出离心管,以免沉淀悬浮)

加入3mL 70%乙醇,温和震荡30Sec,10000rpm离心10min,轻轻弃去上清。

加入3mL 70%乙醇,温和震荡30Sec,10000rpm离心10min,轻轻弃去上清,倒置于干燥的吸水纸上2min。

将离心管敞口室温放置5min,晾干沉淀。

加入100μL溶液IV,温和震荡2min,使沉淀完全溶解。
2楼2020-04-17 15:16:30
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