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金虫 (正式写手)

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[交流] 关于大质粒提取（ＤＮＡ提取）

我查询到一篇文献，里面有几个个步骤，
１.异丙醇沉淀后，沉淀溶解在ＴＥ中，
２.用５Ｍ氯化钠混匀，离心上清转移到一个新管中，
３.再次异丙醇沉淀，离心沉淀溶解在ＴＥ中，
４.用９Ｍ氯化锂静置后离心上清转移到新管中，
５.再次用异丙醇沉淀。

求解释个步骤作用，和目的。

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1楼 2013-12-03 22:51:07

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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★
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biodai质粒提取可以参考：
请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇
取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5 min，彻底弃除上清。
↓
加入20mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。
↓
加入2mL溶液I和40μL溶液B，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
↓
加入4mL溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合）
加入3mL溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）
↓
10000rpm 4℃离心15min，小心吸出上清，轻移至新的20mL离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）
↓
加入6mL异丙醇，充分混匀，室温放置10min。
↓
10000rpm室温离心15min，小心吸弃上清，将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余的液体。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）
↓
加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清。
↓
加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清，倒置于干燥的吸水纸上2min。
↓
将离心管敞口室温放置5min，晾干沉淀。
↓
加入100μL溶液IV，温和震荡2min，使沉淀完全溶解。

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