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Irus

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr熔解曲线问题——质粒与样品的峰不在一条上 已有1人参与

如图,检测结果发现样品的条带较宽
荧光定量pcr熔解曲线问题——质粒与样品的峰不在一条上
熔解曲线
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Irus at 2013-12-02 14:10:41
引物的特异性应该是没问题的,是细菌的通用引物338和518,我们实验室的其他人也用的这个,做的还行啊,就到我这里我重新提取的质粒那个峰很窄,我做了别的菌像尖孢镰刀菌和芽孢杆菌的质粒熔解曲线也都很宽,是不是 ...

熔解峰应该是比较窄的,你提取质粒的那个在我看来是正常的。宽熔解峰说明产物在较大温度范围下熔解,有可能非单一峰。
8楼2013-12-03 02:03:59
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查看全部 17 个回答

yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-30 16:12:55
你扩增质粒上的序列不是你样品的基因吧?

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
2楼2013-11-30 15:36:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-02 16:08:21
Irus: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-19 18:47:54
说明产物不相同。核对一下序列差别和引物特异性。
3楼2013-12-01 02:41:44
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Irus

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxiangdan at 2013-11-30 15:36:55
你扩增质粒上的序列不是你样品的基因吧?

是一样的啊,质粒是用相同的DNA进行pcr之后胶回收在转化链接后培养然后用试剂盒提取的
4楼2013-12-01 08:44:15
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