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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于载体构建的问题，高手解答一下。 已有3人参与

我做真菌的，论文要做干扰载体，问一下有没有这样的载体，干扰载体和超表达载体可以构建在一个载体上，它的功能既能行使超表达某个蛋白，又能对另一基因进行干扰？
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1楼 2013-11-18 11:38:15
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-19 13:23:55
你倒是可以试试看，创造这样的载体，把启动子目的基因等表达盒构建在一起，如果可以的还可以商业化，去卖。工作量不小，是否有效要验证。
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6楼2013-11-19 12:02:41
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
但是不能用同种载体，过表达载体和RNAi干扰的启动子是不一样的。
想法很好
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2楼2013-11-18 20:16:52
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sinoer

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以，但是目前基本没有这种载体，可能会比较大
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3楼2013-11-19 09:29:50
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-18 20:16:52
但是不能用同种载体，过表达载体和RNAi干扰的启动子是不一样的。
想法很好

谢谢了，你的意思是构建两种载体导入到真菌中？有没有这样的案例？总觉得两个载体导入在形式和思路上是不是有点烦赘？
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4楼2013-11-19 11:14:53
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sinoer at 2013-11-19 09:29:50
可以，但是目前基本没有这种载体，可能会比较大

奥，也是我胡乱想的，我的干扰载体需要借助某个蛋白的帮助进入体内才能更好地去干扰，所以想过表达这种蛋白，就可以更好地去执行干扰任务了。
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5楼2013-11-19 11:17:17
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-19 12:02:41
你倒是可以试试看，创造这样的载体，把启动子目的基因等表达盒构建在一起，如果可以的还可以商业化，去卖。工作量不小，是否有效要验证。

谢谢你啦，另外，干扰载体也需要需要启动子吗？我在百度的时候看到一个这样的解答，你觉得可行吗？——
【我们在哺乳动物细胞超表达载体上实现过同时过表答一个基因并且下调另一个基因。
具体是这么实现的，在超表达载体上克隆计划的过表达基因，在另一个干扰载体上克隆shRNA序列。
接下来将干扰载体上含shRNA序列元件（不含promoter）利用酶切位点再克隆到表达基因的下游。
你可以参考一下。】
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7楼2013-11-19 15:38:38
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yushijiang30 at 2013-11-19 15:38:38
谢谢你啦，另外，干扰载体也需要需要启动子吗？我在百度的时候看到一个这样的解答，你觉得可行吗？——
【我们在哺乳动物细胞超表达载体上实现过同时过表答一个基因并且下调另一个基因。
具体是这么实现的，在超 ...

我认为不可行
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8楼2013-11-19 16:05:29
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-19 16:05:29
我认为不可行...

能说一下理由吗？是不是这个载体共用一个启动子？
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9楼2013-11-19 16:18:09
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yushijiang30 at 2013-11-19 16:18:09
能说一下理由吗？是不是这个载体共用一个启动子？...

yes
10楼2013-11-19 18:17:30
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