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runhuahan

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[求助] 请教关于构建克隆进行小RNA表达的问题

最近小弟在做构建克隆进行小RNA表达的实验，但是有几个问题想请教一下各位
1、如果我不知道sRNA的确切序列，只是尽量把这个sRNA连在载体上，也就是这个sRNA前后也有一些多余的序列一起连在表达质粒上，可不可行？
2、sRNA是单链的，连在载体上时是否有方向性，怎样确定这个方向性？
多谢各位了！！！！

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1楼 2012-12-07 09:44:29

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1. 有多余的序列不一定可以。主要看小RNA的二级结构，是否能与目的mRNA形成正确的杂合分子。
2. 连接当然有方向性。你需要给小RNA加一个强启动子或者可调控的，然后正向连入小RNA序列就是表达小RNA，连入reverse complement序列的话就是anti-sense了。

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2楼2012-12-07 13:16:08

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runhuahan

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 13:16:08
1. 有多余的序列不一定可以。主要看小RNA的二级结构，是否能与目的mRNA形成正确的杂合分子。
2. 连接当然有方向性。你需要给小RNA加一个强启动子或者可调控的，然后正向连入小RNA序列就是表达小RNA，连入reverse c ...

谢谢你，但你说正向连入小RNA序列是表达小RNA，不是应该把编码小RNA的序列，也就是他的reverse complement序列连入，这样才能表达目的sRNA吧？

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3楼2012-12-11 14:43:12

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