应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教关于构建克隆进行小RNA表达的问题
91/1返回列表
查看: 1347  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

runhuahan

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教关于构建克隆进行小RNA表达的问题

最近小弟在做构建克隆进行小RNA表达的实验，但是有几个问题想请教一下各位
1、如果我不知道sRNA的确切序列，只是尽量把这个sRNA连在载体上，也就是这个sRNA前后也有一些多余的序列一起连在表达质粒上，可不可行？
2、sRNA是单链的，连在载体上时是否有方向性，怎样确定这个方向性？
多谢各位了！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-07 09:44:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 有多余的序列不一定可以。主要看小RNA的二级结构，是否能与目的mRNA形成正确的杂合分子。
2. 连接当然有方向性。你需要给小RNA加一个强启动子或者可调控的，然后正向连入小RNA序列就是表达小RNA，连入reverse complement序列的话就是anti-sense了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-12-07 13:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runhuahan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-07 13:16:08
1. 有多余的序列不一定可以。主要看小RNA的二级结构，是否能与目的mRNA形成正确的杂合分子。
2. 连接当然有方向性。你需要给小RNA加一个强启动子或者可调控的，然后正向连入小RNA序列就是表达小RNA，连入reverse c ...

谢谢你，但你说正向连入小RNA序列是表达小RNA，不是应该把编码小RNA的序列，也就是他的reverse complement序列连入，这样才能表达目的sRNA吧？
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-11 14:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by runhuahan at 2012-12-11 14:43:12
谢谢你，但你说正向连入小RNA序列是表达小RNA，不是应该把编码小RNA的序列，也就是他的reverse complement序列连入，这样才能表达目的sRNA吧？...

表达的序列是和你连入的序列一致的。转录时是以互补链为模板的。所以考虑一个基因的表达的RNA序列是和基因序列一致的，只是把T换成U。
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-11 14:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runhuahan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-11 14:51:03
表达的序列是和你连入的序列一致的。转录时是以互补链为模板的。所以考虑一个基因的表达的RNA序列是和基因序列一致的，只是把T换成U。...

再次谢谢您，也就说我要表达哪个小RNA，就把它的序列连在表达载体上就行了，对吧
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-11 22:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by runhuahan at 2012-12-11 22:24:13
再次谢谢您，也就说我要表达哪个小RNA，就把它的序列连在表达载体上就行了，对吧...

是的，把与RNA序列相同的对应DNA序列连在载体上就可以了。
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-12 07:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问楼主用的是什么载体呢？
赞一下 回复此楼
keepon
7楼2012-12-12 09:12:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runhuahan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-12-12 09:12:01
请问楼主用的是什么载体呢？

pNM12或者pTRC99a，你有什么推荐的表达载体么？
赞一下 回复此楼
8楼2012-12-12 10:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by runhuahan at 2012-12-12 10:15:48
pNM12或者pTRC99a，你有什么推荐的表达载体么？...

我们一般用的是PCDNA3.1，但是楼主这个是表达sRNA，我不太懂哎。。。嘿嘿。。。
赞一下 回复此楼
keepon
9楼2012-12-13 09:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 runhuahan 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-29 18:04 by 4FFAWE8HcgUD
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 17:31 by 4FFAWE8HcgUD
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 17:30 by 4FFAWE8HcgUD
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +14 晴天加油 2026-08-26 15/750 2026-08-29 11:06 by biily
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭