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求高手回答G418筛选浓度梯度实验问题
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这类细胞实验做的不多，所以我想来请教用过G418做筛选的战友： 我用的是Huh-7细胞系，在一瓶T25中养到大约80%汇合度后转6孔板，24小时继续培养后换含G418梯度的培养基，选的浓度是400,500，600,700,800,900 ug/mL的浓度。我用的G418是Sigma （G8168）G418 disulfide 50mg/mL的水溶液，直接按最终浓度按比例往6孔板中（2ml培养基）加。 文献中提到的Huh-7筛选浓度大约是700ug/mL，但是我的细胞在第三天准备换液的时候发现全死了，全浮起来了。 有一个现象，不知道和这个筛选浓度梯度实验失败是否有关，就是我Huh-7细胞长得很快，没记错的话，两三天就可以长满，按G418浓度筛选的正规流程，好像要等加药后第十天细胞死亡才能确定浓度，不知道是不是长得太快导致细胞死亡？但是平行的一个T25瓶就算长满了细胞还是贴壁的。 不知道哪里有做错的地方，希望大家指正。细胞是不是要先多传个几代，再进行这种实验？ 谢谢！ |
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2楼2014-05-21 17:14:04
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