| 查看: 1714 | 回复: 2 | |||
[求助]
求高手回答G418筛选浓度梯度实验问题
|
|
这类细胞实验做的不多，所以我想来请教用过G418做筛选的战友： 我用的是Huh-7细胞系，在一瓶T25中养到大约80%汇合度后转6孔板，24小时继续培养后换含G418梯度的培养基，选的浓度是400,500，600,700,800,900 ug/mL的浓度。我用的G418是Sigma （G8168）G418 disulfide 50mg/mL的水溶液，直接按最终浓度按比例往6孔板中（2ml培养基）加。 文献中提到的Huh-7筛选浓度大约是700ug/mL，但是我的细胞在第三天准备换液的时候发现全死了，全浮起来了。 有一个现象，不知道和这个筛选浓度梯度实验失败是否有关，就是我Huh-7细胞长得很快，没记错的话，两三天就可以长满，按G418浓度筛选的正规流程，好像要等加药后第十天细胞死亡才能确定浓度，不知道是不是长得太快导致细胞死亡？但是平行的一个T25瓶就算长满了细胞还是贴壁的。 不知道哪里有做错的地方，希望大家指正。细胞是不是要先多传个几代，再进行这种实验？ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重组牛胰蛋白酶在毕赤酵母中的表达
已经有8人回复
- 毕赤酵母转化后遗传霉素筛选问题
已经有14人回复
- 关于毕赤酵母G418筛选
已经有9人回复
- G418 和puromycin共筛选
已经有7人回复
- 关于毕赤酵母gs115可否用转化化学转化
已经有6人回复
- 急求 G418筛选相关问题
已经有4人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 质粒转化之后菌落的问题
已经有9人回复
- real time PCR能测定基因组内某一基因的拷贝数吗？
已经有4人回复
- 【求助/交流】pcDNA3.1能做G418筛选，获得稳定转染株吗
已经有8人回复
- 【求助/交流】G418筛选稳定转染
已经有12人回复
- 【分享】G418筛选稳定表达细胞系
已经有17人回复
2楼2014-05-21 17:14:04
猪猪宝宝0209
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 83.8
- 散金: 10
- 帖子: 31
- 在线: 8.2小时
- 虫号: 4247205
- 注册: 2015-11-26
- 性别: MM
- 专业: 结构工程
3楼2016-03-23 15:22:47
10