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爱音乐之

新虫 (初入文坛)

[求助] 透析浓缩前后蛋白质量的变化

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我在透析复性一个蛋白,透析前浓度为0.4mg/mL,体积约为15mL;;透析完后用硅胶浓缩,体积约为10mL,但是浓度却变为了不足0.1mg/mL。我想问这是正常现象吗?我用的是ND-1000分光光度计的A280测的浓度(我不清楚这个具体是啥)。如果不是正常现象,那么有可能是透析袋不好使呢,还是这个A280测的不只是蛋白含量呢?(此外,透析袋截流量14KD,我目的蛋白50KD左右。)
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同东中郎将

新虫 (小有名气)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-11-06 08:53:03
透析复性一个蛋白,复性率约16.7%,差不多就是这个得率,正常范围。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
2楼2013-11-05 22:22:48
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爱音乐之

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-05 22:22:48
透析复性一个蛋白,复性率约16.7%,差不多就是这个得率,正常范围。

喔,可是没有复性成功的那部分蛋白,也没有透出去啊。还有今天边浓缩边测浓度,变成1mL了,体积又变小十倍了吧,浓度也就0.3……
3楼2013-11-05 22:55:32
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱音乐之 at 2013-11-05 22:55:32
喔,可是没有复性成功的那部分蛋白,也没有透出去啊。还有今天边浓缩边测浓度,变成1mL了,体积又变小十倍了吧,浓度也就0.3……...

做复性是这样的,有沉淀,要离心后才能看得到。
不要浓缩,浓缩损失大,因为大部分复性后蛋白不太稳定,浓缩易聚集沉淀,浓度没有提高。
反正包涵体复性不好做,你要想多回收蛋白,只有从开始做包涵体的时候多准备一些。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
4楼2013-11-06 05:15:07
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