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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 透析浓缩前后蛋白质量的变化
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爱音乐之

新虫 (初入文坛)

[求助] 透析浓缩前后蛋白质量的变化

Sample Text
我在透析复性一个蛋白，透析前浓度为0.4mg/mL，体积约为15mL；；透析完后用硅胶浓缩，体积约为10mL,但是浓度却变为了不足0.1mg/mL。我想问这是正常现象吗？我用的是ND-1000分光光度计的A280测的浓度（我不清楚这个具体是啥）。如果不是正常现象，那么有可能是透析袋不好使呢，还是这个A280测的不只是蛋白含量呢？（此外，透析袋截流量14KD，我目的蛋白50KD左右。）
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1楼 2013-11-04 18:38:14
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-11-06 08:53:03
透析复性一个蛋白，复性率约16.7%，差不多就是这个得率，正常范围。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-11-05 22:22:48
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爱音乐之

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-05 22:22:48
透析复性一个蛋白，复性率约16.7%，差不多就是这个得率，正常范围。

喔，可是没有复性成功的那部分蛋白，也没有透出去啊。还有今天边浓缩边测浓度，变成1mL了，体积又变小十倍了吧，浓度也就0.3……
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3楼2013-11-05 22:55:32
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱音乐之 at 2013-11-05 22:55:32
喔，可是没有复性成功的那部分蛋白，也没有透出去啊。还有今天边浓缩边测浓度，变成1mL了，体积又变小十倍了吧，浓度也就0.3……...

做复性是这样的，有沉淀，要离心后才能看得到。
不要浓缩，浓缩损失大，因为大部分复性后蛋白不太稳定，浓缩易聚集沉淀，浓度没有提高。
反正包涵体复性不好做，你要想多回收蛋白，只有从开始做包涵体的时候多准备一些。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
4楼2013-11-06 05:15:07
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