应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE跑胶，为啥PCR产物一直停留在浓缩胶，没有往变性胶跑下去？？
121/2返回列表12下一页
查看: 2279  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

stephenallan

金虫 (小有名气)

[求助] DGGE跑胶，为啥PCR产物一直停留在浓缩胶，没有往变性胶跑下去？？

最近在做DGGE，PCR产物一直停在点样孔下面，电泳就跑到浓缩胶底，没有再往变性胶跑。
PCR产物约在250bp.
变性胶10%gel，梯度试了两个35-55%，,55-70%，都没有成功。
电泳条件：80V，13h；300,3h；200v，5h都试了，一样没有跑下去。
想了好久，排除了一些原因，还是没有 弄明白！

求助，这是什么原因？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-02 19:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-03 17:31:42

没图嘛...
1、检查下你配的TAE buffer的pH值是不是正常
2、你换一下引物，引物的bp值不要太大了，199bp的就差不多了(我也不知道你的是多大的)
3、调整下上样量，往小了调，比如5μl的可以换成3μl或者2μl的
4、虽然不太可能，但是检查下你的胶有没有灌反了，从上到下是不是低到高的
5、你可以先用高电压比如240V把DNA先冲下来，然后换到差不多130-140V这样跑5-6小时  或者80过夜跑个14-15个小时这样

祝实验顺利...
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-02 21:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephenallan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-02 21:20:13

没图嘛...
1、检查下你配的TAE buffer的pH值是不是正常
2、你换一下引物，引物的bp值不要太大了，199bp的就差不多了(我也不知道你的是多大的)
3、调整下上样量，往小了调，比如5μl的可以换成3μl或者2 ...

别人用同一个仪器，TAE buffer一样，跑出东西了。
上样量是10μl，我看其他做的说是20-40μl的，还要往下调 么？为甚么哩 ？
灌胶这个是没错的，
第5个我试试看，谢谢~
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-02 22:15:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephenallan

金虫 (小有名气)
http://pan.baidu.com/s/1zh6n6

http://pan.baidu.com/s/1kU2jU

这是我跑的PCR产物
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-04 16:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephenallan

金虫 (小有名气)
求各路大神，慷慨帮助回复~
不胜感激
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-04 16:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想问下 你的引物是有GC夹子的吗
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-09 09:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jxmingcyl

铁虫 (初入文坛)
你好，你的这个问题解决了吗？我也遇到这个麻烦了哦
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-10 17:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

银小耳

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

也有可能是你电极搞反了
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-19 13:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轩尼骑士

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

胶浓度太大 改为8%最好
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-25 17:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephenallan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 银小耳 at 2013-11-19 13:31:00
也有可能是你电极搞反了

仪器就一个插头的，不会搞错正负极的^_^

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2013-11-27 00:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stephenallan 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +12 爱看书的可乐 2026-08-26 14/700 2026-08-26 11:49 by coolysnow
[基金申请] 系统查不到 +5 董八千 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:29 by panjy.cn
[基金申请] 怎么查啊 +4 huang1991js 2026-08-26 4/200 2026-08-26 11:26 by panjy.cn
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +22 koalala 2026-08-24 25/1250 2026-08-26 11:14 by dxcharlary
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 出来了 +8 trojank 2026-08-26 8/400 2026-08-26 09:00 by gxc
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭