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stephenallan金虫 (小有名气)
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DGGE跑胶，为啥PCR产物一直停留在浓缩胶，没有往变性胶跑下去？？
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最近在做DGGE，PCR产物一直停在点样孔下面，电泳就跑到浓缩胶底，没有再往变性胶跑。 PCR产物约在250bp. 变性胶10%gel，梯度试了两个35-55%，,55-70%，都没有成功。 电泳条件：80V，13h；300,3h；200v，5h都试了，一样没有跑下去。 想了好久，排除了一些原因，还是没有 弄明白！ 求助，这是什么原因？ |
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stephenallan
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10楼2013-11-27 00:29:06
【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-03 17:31:42
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 没图嘛... 1、检查下你配的TAE buffer的pH值是不是正常 2、你换一下引物，引物的bp值不要太大了，199bp的就差不多了(我也不知道你的是多大的) 3、调整下上样量，往小了调，比如5μl的可以换成3μl或者2μl的 4、虽然不太可能，但是检查下你的胶有没有灌反了，从上到下是不是低到高的 5、你可以先用高电压比如240V把DNA先冲下来，然后换到差不多130-140V这样跑5-6小时 或者80过夜跑个14-15个小时这样 祝实验顺利... |
2楼2013-11-02 21:20:13
stephenallan
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3楼2013-11-02 22:15:14
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4楼2013-11-04 16:07:14
30