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stephenallan

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[求助] DGGE跑胶，为啥PCR产物一直停留在浓缩胶，没有往变性胶跑下去？？

最近在做DGGE，PCR产物一直停在点样孔下面，电泳就跑到浓缩胶底，没有再往变性胶跑。
PCR产物约在250bp.
变性胶10%gel，梯度试了两个35-55%，,55-70%，都没有成功。
电泳条件：80V，13h；300,3h；200v，5h都试了，一样没有跑下去。
想了好久，排除了一些原因，还是没有弄明白！

求助，这是什么原因？

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1楼 2013-11-02 19:44:17

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stephenallan

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求各路大神，慷慨帮助回复~
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5楼2013-11-04 16:09:40

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牧炀

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【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩。 2013-11-03 17:31:42

没图嘛...
1、检查下你配的TAE buffer的pH值是不是正常
2、你换一下引物，引物的bp值不要太大了，199bp的就差不多了(我也不知道你的是多大的)
3、调整下上样量，往小了调，比如5μl的可以换成3μl或者2μl的
4、虽然不太可能，但是检查下你的胶有没有灌反了，从上到下是不是低到高的
5、你可以先用高电压比如240V把DNA先冲下来，然后换到差不多130-140V这样跑5-6小时或者80过夜跑个14-15个小时这样

祝实验顺利...

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2楼2013-11-02 21:20:13

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