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TLR7的蛋白表达
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各位前辈，小辈最近在做小鼠肺组织的TLR7（140kd）的蛋白表达，上样量试过40微克，因为在140kd的位置没有出现条带，因此加大上样量80微克，用的是10%的分离胶，4%浓缩胶，电泳：浓缩胶80V45min，分离胶120V2h，转膜：300ma2.5h，在冰盒中进行，脱脂牛奶封闭：2h，一抗4度过夜1:500,1:1000，1:1500,1:2000，均试过，二抗1:20000，都没有在140kd的位置出现条带，在50,100kd有出现条带，说明书上也在50,100kd标有条带，用的是CST的抗体，是兔多克隆抗体，请问各位前辈是什么原因导致140kd的位置没有出现条带，请大家帮忙分析一下，不胜感激！图中最左边是marker，第一条条带是170kd,第二条130kd,第三条100kd,第四条70kd,第五条55kd,第六条40kd TLR7.jpg  合并m.jpg  合并marker.jpg |
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2楼2014-06-11 17:13:33