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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠电转问题
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)

[求助] 大肠电转问题

大肠杆菌电转，空菌电击可达10msec，是浓度过稀的原因吗？怎样才能做好电转，不爆杯呢？
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1楼 2013-10-27 14:58:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
囧囧俏(kx444555代发): 金币+1, 鼓励交流 2013-10-28 15:08:44
time constant与设置有关，所以即使的空菌，参数应该与实际电转化时是一样的。电转化的体系里不能含有盐，否则会形成电弧。
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2楼2013-10-28 03:58:17
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-28 03:58:17
time constant与设置有关，所以即使的空菌，参数应该与实际电转化时是一样的。电转化的体系里不能含有盐，否则会形成电弧。

你是说设置的有问题，所以高达10msec?
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3楼2013-10-28 08:24:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
囧囧俏(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2013-10-28 15:08:49
囧囧俏: 金币+47, ★有帮助 2013-11-03 19:05:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-10-28 08:24:44
你是说设置的有问题，所以高达10msec?...

我一般用0.2cm的杯子，转化用的参数设置是电容（25μF）、电阻（200Ω）、电压（2.5kv）后，时间常数是5ms左右。你的时间常数比较大，有可能是电阻设的不一样，10ms也不是不能用的。我做其它菌株条件优化的时候也试过的。如果电压能上到预设，应该说明体系没有太大问题。
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4楼2013-10-28 08:52:44
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-28 08:52:44
我一般用0.2cm的杯子，转化用的参数设置是电容（25μF）、电阻（200Ω）、电压（2.5kv）后，时间常数是5ms左右。你的时间常数比较大，有可能是电阻设的不一样，10ms也不是不能用的。我做其它菌株条件优化的时候也试 ...

我用的是0.1cm的杯子 电容电阻和你的一样 电压1.8kv 加了40ul 现在问题是我空菌电转10ms 但加了连接产物爆杯了什么也没长，产物过了柱子用水洗脱的，对照组转化时间7ms也是什么也没有长
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5楼2013-10-28 09:26:50
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phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
体系里没有盐离子就可以有效避免产生电弧
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6楼2013-10-28 15:18:09
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 01:08:28
主要还是洗干净，不含离子。还有就是在低温，对效率影响蛮高的。用的东西都预冷。
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7楼2013-10-28 15:22:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 01:09:06
引用回帖:
5楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-10-28 09:26:50
我用的是0.1cm的杯子 电容电阻和你的一样 电压1.8kv 加了40ul 现在问题是我空菌电转10ms 但加了连接产物爆杯了什么也没长，产物过了柱子用水洗脱的，对照组转化时间7ms也是什么也没有长...

0.1的杯子一般是用1.8kv电压。转化时是否做了正对照？比方说转空载体质粒。空感受态是否涂LB板计算菌体死亡率？电激后应立即加入培养液复苏，时间长了菌的死亡率会非常高。
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8楼2013-10-29 00:22:19
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-29 00:22:19
0.1的杯子一般是用1.8kv电压。转化时是否做了正对照？比方说转空载体质粒。空感受态是否涂LB板计算菌体死亡率？电激后应立即加入培养液复苏，时间长了菌的死亡率会非常高。...

立即加了soc进行复苏，对照组也是什么也没有长，对照组电击时间达7ms
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9楼2013-10-30 08:37:00
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-29 00:22:19
0.1的杯子一般是用1.8kv电压。转化时是否做了正对照？比方说转空载体质粒。空感受态是否涂LB板计算菌体死亡率？电激后应立即加入培养液复苏，时间长了菌的死亡率会非常高。...

空感受态没有涂布LB 另外加完培养液复苏一小时后，感觉菌体很粘稠的，怎么回事呢？
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10楼2013-10-30 08:38:26
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