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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠电转问题
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouxiaofei at 2013-10-28 15:22:37
主要还是洗干净，不含离子。还有就是在低温，对效率影响蛮高的。用的东西都预冷。

连接产物过了柱子 应该干净了吧 用的水洗脱的
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11楼2013-10-30 08:39:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-10-30 08:38:26
空感受态没有涂布LB 另外加完培养液复苏一小时后，感觉菌体很粘稠的，怎么回事呢？...

复苏后的菌体不应该粘稠。如果出现这种问题，可能是点激出现问题，发生太多菌体死亡。你的质粒对照也什么都没长的话，说明实验过程有问题，可能是点激有问题或者感受态不好。质粒的电转效率应该很高的。
你试试做两个对照：1. 感受态不电激；2. 空感受态电激。复苏步骤相同，稀释后涂LB板，看看是不是电激后死亡太严重。
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12楼2013-10-31 00:11:53
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 00:11:53
复苏后的菌体不应该粘稠。如果出现这种问题，可能是点激出现问题，发生太多菌体死亡。你的质粒对照也什么都没长的话，说明实验过程有问题，可能是点激有问题或者感受态不好。质粒的电转效率应该很高的。
你试试做 ...

谢谢 应该是感受态的问题 但每一步都觉得没错 不知问题在哪 再试试看吧
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13楼2013-10-31 14:44:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 囧囧俏 at 2013-10-31 14:44:53
谢谢 应该是感受态的问题 但每一步都觉得没错 不知问题在哪 再试试看吧...

感受态是自己制备的？
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14楼2013-10-31 23:12:58
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囧囧俏

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 23:12:58
感受态是自己制备的？...

恩对 感受就是用甘油洗三次后 重悬得到
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15楼2013-11-01 15:41:41
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