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henghengyouyou

银虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白的蛋白质互作还是很迷惑,请指点!

HELLO!
各位好,目前我在植物中获得一个基因,该基因编码膜相关蛋白M(膜外domain+跨膜+膜内domain),我想筛选和M蛋白互作的蛋白。但是目前看了相关文献和咨询了公司的人员。觉得有点困惑,请懂的帮忙指点下。
1.有的文献和公司人说Y2H可以对其进行试验,可以把膜外或者膜内domain分别作为诱饵进行研究;
2. 又有说膜相关蛋白只能使用膜系统的杂交系统,比如split ubiquitin 等,这样就可以把完整的蛋白序列作为诱饵进行研究。请问这种系统只能筛选与M互作的膜相关的蛋白或者内膜蛋白么?如果膜外结构域和膜外的非膜蛋白作用呢,这样是不是就不能产生报告信号进入细胞核?膜系统的Y2H是可以买kit的还是只有公司服务?
3.有何比较好的建议?
非常感谢!
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
2楼2013-10-24 09:19:37
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DNA药物

金虫 (著名写手)

只能说,你流弊了,膜蛋白很难搞的!
向好!
3楼2013-10-24 17:06:35
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henghengyouyou

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by DNA药物 at 2013-10-24 17:06:35
只能说,你流弊了,膜蛋白很难搞的!

有多难搞?帮忙分析分析?
4楼2013-10-25 00:00:24
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DNA药物

金虫 (著名写手)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-25 09:48:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by henghengyouyou at 2013-10-25 00:00:24
有多难搞?帮忙分析分析?...

正如你所说,这是一种整合膜蛋白。如果是一种简单的膜蛋白,我们可以敲除其几个作为引导肽的氨基酸,使其不能定位到膜上,然后做相关的Y2H。但看你所说,这种蛋白不简单。搞不好是类似于GPCR一样的信号感受体,如果你做出来了,呵呵,大文章!!!曾今有个做植物逆境信号转导的杰青说过,不要轻易的去搞膜蛋白。祝你好运
向好!
5楼2013-10-25 09:13:51
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henghengyouyou

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by DNA药物 at 2013-10-25 09:13:51
正如你所说,这是一种整合膜蛋白。如果是一种简单的膜蛋白,我们可以敲除其几个作为引导肽的氨基酸,使其不能定位到膜上,然后做相关的Y2H。但看你所说,这种蛋白不简单。搞不好是类似于GPCR一样的信号感受体,如果 ...

谢谢,没办法,注定如此。呵呵。
6楼2013-10-26 06:00:37
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
henghengyouyou: 金币+2 2013-10-27 05:15:31
个人建议:我觉得1方案比较简单可行,如果是我,我会先用1的方案来做,等找到相互作用的蛋白之后,再用2中的方法做个验证,当做补充证明。
7楼2013-10-26 11:22:51
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