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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 膜蛋白的蛋白质互作还是很迷惑，请指点！
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henghengyouyou

银虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白的蛋白质互作还是很迷惑，请指点！

HELLO!
各位好，目前我在植物中获得一个基因，该基因编码膜相关蛋白M（膜外domain+跨膜+膜内domain）,我想筛选和M蛋白互作的蛋白。但是目前看了相关文献和咨询了公司的人员。觉得有点困惑，请懂的帮忙指点下。
1.有的文献和公司人说Y2H可以对其进行试验，可以把膜外或者膜内domain分别作为诱饵进行研究；
2. 又有说膜相关蛋白只能使用膜系统的杂交系统，比如split ubiquitin 等，这样就可以把完整的蛋白序列作为诱饵进行研究。请问这种系统只能筛选与M互作的膜相关的蛋白或者内膜蛋白么？如果膜外结构域和膜外的非膜蛋白作用呢，这样是不是就不能产生报告信号进入细胞核？膜系统的Y2H是可以买kit的还是只有公司服务？
3.有何比较好的建议？
非常感谢！
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1楼 2013-10-24 06:02:08
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
路过
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-10-24 09:19:37
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DNA药物

金虫 (著名写手)
只能说，你流弊了，膜蛋白很难搞的！
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向好！
3楼2013-10-24 17:06:35
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henghengyouyou

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by DNA药物 at 2013-10-24 17:06:35
只能说，你流弊了，膜蛋白很难搞的！

有多难搞？帮忙分析分析？
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4楼2013-10-25 00:00:24
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DNA药物

金虫 (著名写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-25 09:48:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by henghengyouyou at 2013-10-25 00:00:24
有多难搞？帮忙分析分析？...

正如你所说，这是一种整合膜蛋白。如果是一种简单的膜蛋白，我们可以敲除其几个作为引导肽的氨基酸，使其不能定位到膜上，然后做相关的Y2H。但看你所说，这种蛋白不简单。搞不好是类似于GPCR一样的信号感受体，如果你做出来了，呵呵，大文章！！！曾今有个做植物逆境信号转导的杰青说过，不要轻易的去搞膜蛋白。祝你好运
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向好！
5楼2013-10-25 09:13:51
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henghengyouyou

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by DNA药物 at 2013-10-25 09:13:51
正如你所说，这是一种整合膜蛋白。如果是一种简单的膜蛋白，我们可以敲除其几个作为引导肽的氨基酸，使其不能定位到膜上，然后做相关的Y2H。但看你所说，这种蛋白不简单。搞不好是类似于GPCR一样的信号感受体，如果 ...

谢谢，没办法，注定如此。呵呵。
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6楼2013-10-26 06:00:37
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
henghengyouyou: 金币+2 2013-10-27 05:15:31
个人建议：我觉得1方案比较简单可行，如果是我，我会先用1的方案来做，等找到相互作用的蛋白之后，再用2中的方法做个验证，当做补充证明。
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7楼2013-10-26 11:22:51
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