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落于忘川

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于蛋白盐析的问题

本人实验新手一个,以前也就是按着老师给的步骤做过本科生实验,现在自己做发现好多基础的问题都搞不清楚,希望各位大神能指点一二,让我这只小虫子也略微对某些实验技能了解一些。
  正题:在做酶的分离的时候准备用硫酸铵盐析,但是遇到几个问题:
1.分级分离是不是比直接确定一个硫酸铵的饱和浓度去盐析要好些
2.现在在尝试阶段,如果想做分级分离的话要怎么确定一系列的浓度梯度呢?

本人想做正交试验探究提取条件,SOD的,已经确定了一个因素是提取时缓冲液的量,正交试验个人觉得至少三个因素才有必要,所以在如果做分级的盐析,能不能把第一次盐析盐浓度作为一个因素,第二个盐浓度作为一个因素,以此类推,然后去正交?
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铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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137167741: 金币+2, 鼓励交流~~ 2013-10-22 09:25:07
落于忘川: 金币+1, 有帮助 2013-10-23 01:41:03
针对第一问题:分级分离要好,盐浓度从小到大逐级分离,可以除去不相关的蛋白。
针对第二个:向搅拌的情况下向你的酶溶液中先加盐,等看见沉淀时就停止加盐,之后离心,对上清进行测试。你也可以选择20%-60%的盐浓度进行盐析。
2楼2013-10-22 08:32:15
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