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樱落夕

铁虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
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虫号: 2163274
注册: 2012-12-03
性别: MM
专业: 植物生理与生化

[求助] 槭树科DNA提取

我在提取槭树科红枫的时候，DNA提不出来，或者提出来的含的杂质太多了，加了PVP和抗坏血酸去杂质，不管用，急求各给我解答，谢谢

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1楼 2013-10-21 14:39:22

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kkshaxqd

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
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专业: 生物信息学

【答案】应助回帖

本试验在参照陈坤松IS2]等提取DNA的方法基础上加以改进，找到更适合含多酚
累植物叶片基因组DNA提取的方法，具体步骤如下：
(1)取100mg血红鸡爪槭叶片置液氮种冷冻，研磨成粉，迅速置入盛有lml
DNA
提取缓冲液1(含209／L CTAB、20 g／L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、100mmol／L Tris—HCl
(pH8．0)、25
mmol／L EDTA与2mol／LnaCl)的离心管中，再加入1％B一巯基乙醇，颠
倒混匀，置于冰浴中30min，其问不断混匀，防止样品结冻凝固于管底；
(2)于4℃下以12000rpm离心lmin，弃上清，加入700pl 65预热的DNA提取
缓冲液2，加1％B．巯基乙醇，震荡混匀，于65℃水浴20min，离心10min；
(3)吸取上清液于新离心管中，每管加入等体积Tris饱和酚／氯仿／异戊醇(25：
24：1)，轻轻颠倒混匀，冰上放置10min，4℃条件下12000rpm，离心10min；
(4)取上清液，加等体积的氯仿／异戊醇，40c条件下12000rpm，离心10min；
(5)转移上清液于另一离心管，加2／3倍体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，室温放
置15min：
(6)4。C条件下12000rpm，离心10min，去上清液；
(7)加100pl的70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，室温下微干，溶于509lTE缓冲
液；
(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；
(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；
(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中．20。C放置
0．5h，12000rpm，离心10min，出去上清液；
(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；
(12)测OD值，琼脂糖凝胶电泳分析。