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槭树科DNA提取
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| 我在提取槭树科红枫的时候，DNA提不出来，或者提出来的含的杂质太多了，加了PVP和抗坏血酸去杂质，不管用，急求各给我解答，谢谢 |
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kkshaxqd
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【答案】应助回帖
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本试验在参照陈坤松IS2]等提取DNA的方法基础上加以改进，找到更适合含多酚 累植物叶片基因组DNA提取的方法，具体步骤如下： (1)取100mg血红鸡爪槭叶片置液氮种冷冻，研磨成粉，迅速置入盛有lml DNA 提取缓冲液1(含209／L CTAB、20 g／L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、100mmol／L Tris—HCl (pH8．0)、25 mmol／L EDTA与2mol／LnaCl)的离心管中，再加入1％B一巯基乙醇，颠 倒混匀，置于冰浴中30min，其问不断混匀，防止样品结冻凝固于管底； (2)于4℃下以12000rpm离心lmin，弃上清，加入700pl 65预热的DNA提取 缓冲液2，加1％B．巯基乙醇，震荡混匀，于65℃水浴20min，离心10min； (3)吸取上清液于新离心管中，每管加入等体积Tris饱和酚／氯仿／异戊醇(25： 24：1)，轻轻颠倒混匀，冰上放置10min，4℃条件下12000rpm，离心10min； (4)取上清液，加等体积的氯仿／异戊醇，40c条件下12000rpm，离心10min； (5)转移上清液于另一离心管，加2／3倍体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，室温放 置15min： (6)4。C条件下12000rpm，离心10min，去上清液； (7)加100pl的70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，室温下微干，溶于509lTE缓冲 液； (8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h； (9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min； (10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中．20。C放置 0．5h，12000rpm，离心10min，出去上清液； (11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE； (12)测OD值，琼脂糖凝胶电泳分析。 |
9楼2013-10-29 15:56:41
starseacow
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kkshaxqd
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4楼2013-10-25 20:17:24
