应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 槭树科DNA提取
121/2返回列表12下一页
查看: 1985  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

樱落夕

铁虫 (初入文坛)

[求助] 槭树科DNA提取

我在提取槭树科红枫的时候，DNA提不出来，或者提出来的含的杂质太多了，加了PVP和抗坏血酸去杂质，不管用，急求各给我解答，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-21 14:39:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kkshaxqd at 2013-10-25 20:17:24
楼主好，我想问一下，枫叶秋天取得发红发黄的能用来提取DNA么？采下后用硅胶干燥，最近准备提DNA，但不知道这个材料能不能提，提取效果怎样，所以想问一下，谢谢。

我没用硅胶干燥，直接提的，但是提出来杂质很多基本不能用，一般提DNA都是采新鲜幼嫩的叶片，您可以试试
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-10-27 10:14:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
楼主最好明确问题，提取中哪一步出了问题，有什么杂质，所谓提不出来指测OD值不对还是电泳有问题？
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-10-21 18:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-10-21 18:22:38
楼主最好明确问题，提取中哪一步出了问题，有什么杂质，所谓提不出来指测OD值不对还是电泳有问题？

电泳没有条带
回复此楼
3楼2013-10-25 13:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkshaxqd

金虫 (小有名气)
楼主好，我想问一下，枫叶秋天取得发红发黄的能用来提取DNA么？采下后用硅胶干燥，最近准备提DNA，但不知道这个材料能不能提，提取效果怎样，所以想问一下，谢谢。
赞一下 回复此楼
我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
4楼2013-10-25 20:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkshaxqd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 樱落夕 at 2013-10-27 10:14:45
我没用硅胶干燥，直接提的，但是提出来杂质很多基本不能用，一般提DNA都是采新鲜幼嫩的叶片，您可以试试...

哦，可现在是秋天——冬天啊，只能采老叶了，有没有人或文献说过可以用老叶提呢？杂质什么，不是要加RNA酶等处理再跑验证么。
赞一下 回复此楼
我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
6楼2013-10-28 21:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kkshaxqd at 2013-10-28 21:22:07
哦，可现在是秋天——冬天啊，只能采老叶了，有没有人或文献说过可以用老叶提呢？杂质什么，不是要加RNA酶等处理再跑验证么。...

你菜枝头的那些叶片，最顶端的就可以了，不用加RNA酶，DNA都提不出来，我们提的过程中RAN早就降解了
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-29 10:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkshaxqd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 樱落夕 at 2013-10-29 10:16:39
你菜枝头的那些叶片，最顶端的就可以了，不用加RNA酶，DNA都提不出来，我们提的过程中RAN早就降解了...

哦，这样啊，也就是说理论上秋天的枫叶也是能提取DNA得吧，好的，谢谢，不过，我看文献说，秋天的枫叶中DNA被降解，多糖和花青素什么会形成很大的干扰的，这东西，真不好整。。。
赞一下 回复此楼
我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
8楼2013-10-29 14:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkshaxqd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本试验在参照陈坤松IS2]等提取DNA的方法基础上加以改进，找到更适合含多酚
累植物叶片基因组DNA提取的方法，具体步骤如下：
(1)取100mg血红鸡爪槭叶片置液氮种冷冻，研磨成粉，迅速置入盛有lml
DNA
提取缓冲液1(含209／L CTAB、20 g／L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、100mmol／L Tris—HCl
(pH8．0)、25
mmol／L EDTA与2mol／LnaCl)的离心管中，再加入1％B一巯基乙醇，颠
倒混匀，置于冰浴中30min，其问不断混匀，防止样品结冻凝固于管底；
(2)于4℃下以12000rpm离心lmin，弃上清，加入700pl 65预热的DNA提取
缓冲液2，加1％B．巯基乙醇，震荡混匀，于65℃水浴20min，离心10min；
(3)吸取上清液于新离心管中，每管加入等体积Tris饱和酚／氯仿／异戊醇(25：
24：1)，轻轻颠倒混匀，冰上放置10min，4℃条件下12000rpm，离心10min；
(4)取上清液，加等体积的氯仿／异戊醇，40c条件下12000rpm，离心10min；
(5)转移上清液于另一离心管，加2／3倍体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，室温放
置15min：
(6)4。C条件下12000rpm，离心10min，去上清液；
(7)加100pl的70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，室温下微干，溶于509lTE缓冲
液；
(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；
(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；
(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中．20。C放置
0．5h，12000rpm，离心10min，出去上清液；
(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；
(12)测OD值，琼脂糖凝胶电泳分析。
赞一下 回复此楼
我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
9楼2013-10-29 15:56:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by kkshaxqd at 2013-10-29 14:49:12
哦，这样啊，也就是说理论上秋天的枫叶也是能提取DNA得吧，好的，谢谢，不过，我看文献说，秋天的枫叶中DNA被降解，多糖和花青素什么会形成很大的干扰的，这东西，真不好整。。。...

就是的，我采的四五月份的叶子，放到-80度下，现在提取也是提不出来，你如果提出来了分享一下吧，我也着急用，谢谢啦
赞一下 回复此楼
10楼2013-10-30 12:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 樱落夕 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 言之凿凿，8月21号(明天)放榜 +13 医学老男孩 2026-08-20 15/750 2026-08-20 15:19 by chengyan1220
[基金申请] 时间戳又变了 +3 wuchongjun 2026-08-20 4/200 2026-08-20 15:18 by felixwseu
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +17 基诺咪客 2026-08-17 21/1050 2026-08-20 14:54 by 昝占全2025
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭