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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 槭树科DNA提取
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樱落夕

铁虫 (初入文坛)

[求助] 槭树科DNA提取

我在提取槭树科红枫的时候，DNA提不出来，或者提出来的含的杂质太多了，加了PVP和抗坏血酸去杂质，不管用，急求各给我解答，谢谢
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1楼 2013-10-21 14:39:22
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樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kkshaxqd at 2013-10-25 20:17:24
楼主好，我想问一下，枫叶秋天取得发红发黄的能用来提取DNA么？采下后用硅胶干燥，最近准备提DNA，但不知道这个材料能不能提，提取效果怎样，所以想问一下，谢谢。

我没用硅胶干燥，直接提的，但是提出来杂质很多基本不能用，一般提DNA都是采新鲜幼嫩的叶片，您可以试试
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5楼2013-10-27 10:14:45
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
楼主最好明确问题，提取中哪一步出了问题，有什么杂质，所谓提不出来指测OD值不对还是电泳有问题？
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-10-21 18:22:38
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樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-10-21 18:22:38
楼主最好明确问题，提取中哪一步出了问题，有什么杂质，所谓提不出来指测OD值不对还是电泳有问题？

电泳没有条带
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3楼2013-10-25 13:06:09
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kkshaxqd

金虫 (小有名气)
楼主好，我想问一下，枫叶秋天取得发红发黄的能用来提取DNA么？采下后用硅胶干燥，最近准备提DNA，但不知道这个材料能不能提，提取效果怎样，所以想问一下，谢谢。
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我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
4楼2013-10-25 20:17:24
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kkshaxqd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 樱落夕 at 2013-10-27 10:14:45
我没用硅胶干燥，直接提的，但是提出来杂质很多基本不能用，一般提DNA都是采新鲜幼嫩的叶片，您可以试试...

哦，可现在是秋天——冬天啊，只能采老叶了，有没有人或文献说过可以用老叶提呢？杂质什么，不是要加RNA酶等处理再跑验证么。
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我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
6楼2013-10-28 21:22:07
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樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kkshaxqd at 2013-10-28 21:22:07
哦，可现在是秋天——冬天啊，只能采老叶了，有没有人或文献说过可以用老叶提呢？杂质什么，不是要加RNA酶等处理再跑验证么。...

你菜枝头的那些叶片，最顶端的就可以了，不用加RNA酶，DNA都提不出来，我们提的过程中RAN早就降解了
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7楼2013-10-29 10:16:39
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kkshaxqd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 樱落夕 at 2013-10-29 10:16:39
你菜枝头的那些叶片，最顶端的就可以了，不用加RNA酶，DNA都提不出来，我们提的过程中RAN早就降解了...

哦，这样啊，也就是说理论上秋天的枫叶也是能提取DNA得吧，好的，谢谢，不过，我看文献说，秋天的枫叶中DNA被降解，多糖和花青素什么会形成很大的干扰的，这东西，真不好整。。。
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我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
8楼2013-10-29 14:49:12
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kkshaxqd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本试验在参照陈坤松IS2]等提取DNA的方法基础上加以改进，找到更适合含多酚
累植物叶片基因组DNA提取的方法，具体步骤如下：
(1)取100mg血红鸡爪槭叶片置液氮种冷冻，研磨成粉，迅速置入盛有lml
DNA
提取缓冲液1(含209／L CTAB、20 g／L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、100mmol／L Tris—HCl
(pH8．0)、25
mmol／L EDTA与2mol／LnaCl)的离心管中，再加入1％B一巯基乙醇，颠
倒混匀，置于冰浴中30min，其问不断混匀，防止样品结冻凝固于管底；
(2)于4℃下以12000rpm离心lmin，弃上清，加入700pl 65预热的DNA提取
缓冲液2，加1％B．巯基乙醇，震荡混匀，于65℃水浴20min，离心10min；
(3)吸取上清液于新离心管中，每管加入等体积Tris饱和酚／氯仿／异戊醇(25：
24：1)，轻轻颠倒混匀，冰上放置10min，4℃条件下12000rpm，离心10min；
(4)取上清液，加等体积的氯仿／异戊醇，40c条件下12000rpm，离心10min；
(5)转移上清液于另一离心管，加2／3倍体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，室温放
置15min：
(6)4。C条件下12000rpm，离心10min，去上清液；
(7)加100pl的70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，室温下微干，溶于509lTE缓冲
液；
(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；
(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；
(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中．20。C放置
0．5h，12000rpm，离心10min，出去上清液；
(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；
(12)测OD值，琼脂糖凝胶电泳分析。
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我的生命，不断在尘世中寻找，探寻超脱的方法。
9楼2013-10-29 15:56:41
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樱落夕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by kkshaxqd at 2013-10-29 14:49:12
哦，这样啊，也就是说理论上秋天的枫叶也是能提取DNA得吧，好的，谢谢，不过，我看文献说，秋天的枫叶中DNA被降解，多糖和花青素什么会形成很大的干扰的，这东西，真不好整。。。...

就是的，我采的四五月份的叶子，放到-80度下，现在提取也是提不出来，你如果提出来了分享一下吧，我也着急用，谢谢啦
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10楼2013-10-30 12:26:50
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