24小时热门版块排行榜    

查看: 3206  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

litterone123

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人不用试剂盒做出5’RACE吗? 已有3人参与

我最近在做5’RACE,前段时间看见有人介绍不用试剂盒也能做出5'RACE.就按他的说法来做。他的帖子上写的“在反转录的过程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'这个接头引物。在反转录之后这段序列就会位于整个mRNA反转录出来的cDNA的最前端。”我用这个引物做了反转录,然后用保守序列的引物对cDNA进行了扩增,确实得到了大小相符的目的片段,还心中窃喜觉得马上大功告成了。但后来又用特异引物来扩增5’端的时候出来的带却在100-250之间(我的目的带有1500左右)。降低了退火温度也不行。请问一下有没有人做过类似的实验???急求 。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

RACE

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljuile0713

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主问一下,这个接头是用普通的反转录试剂盒就能实现吗,比如takara的反转录试剂盒?还是需要别的酶
6楼2015-10-07 11:17:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

yujitianqing

铁虫 (正式写手)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-21 11:49:49
反转录是用随机引物比如Random 9 mers,得到cDNA;再用5’引物和3’特异性引物进行PCR得到5’端的的片段……
2楼2013-10-21 11:33:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

混沌声神

新虫 (初入文坛)

我也想知道。。。
3楼2014-09-22 12:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个序列5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'是Clontech试剂盒里的SMARTer II A Oligonucleotide,以前看过一个帖子说后面的3个GGG要磷酸化的啊,不知楼主是怎样合成的这个序列。
让羽毛再飞一会儿
4楼2015-09-15 09:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见