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litterone123新虫 (初入文坛)
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有人不用试剂盒做出5’RACE吗？ 已有3人参与
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| 我最近在做5’RACE，前段时间看见有人介绍不用试剂盒也能做出5'RACE.就按他的说法来做。他的帖子上写的“在反转录的过程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'这个接头引物。在反转录之后这段序列就会位于整个mRNA反转录出来的cDNA的最前端。”我用这个引物做了反转录，然后用保守序列的引物对cDNA进行了扩增，确实得到了大小相符的目的片段，还心中窃喜觉得马上大功告成了。但后来又用特异引物来扩增5’端的时候出来的带却在100-250之间（我的目的带有1500左右）。降低了退火温度也不行。请问一下有没有人做过类似的实验？？？急求 。。。 |
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