应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人不用试剂盒做出5’RACE吗？
91/1返回列表
查看: 2949  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

litterone123

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人不用试剂盒做出5’RACE吗？ 已有3人参与

我最近在做5’RACE，前段时间看见有人介绍不用试剂盒也能做出5'RACE.就按他的说法来做。他的帖子上写的“在反转录的过程中加入5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'这个接头引物。在反转录之后这段序列就会位于整个mRNA反转录出来的cDNA的最前端。”我用这个引物做了反转录，然后用保守序列的引物对cDNA进行了扩增，确实得到了大小相符的目的片段，还心中窃喜觉得马上大功告成了。但后来又用特异引物来扩增5’端的时候出来的带却在100-250之间（我的目的带有1500左右）。降低了退火温度也不行。请问一下有没有人做过类似的实验？？？急求 。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

RACE

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-20 22:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujitianqing

铁虫 (正式写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-21 11:49:49
反转录是用随机引物比如Random 9 mers，得到cDNA；再用5’引物和3’特异性引物进行PCR得到5’端的的片段……
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-21 11:33:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

混沌声神

新虫 (初入文坛)
我也想知道。。。
回复此楼
3楼2014-09-22 12:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个序列5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG–3'是Clontech试剂盒里的SMARTer II A Oligonucleotide，以前看过一个帖子说后面的3个GGG要磷酸化的啊，不知楼主是怎样合成的这个序列。
赞一下 回复此楼
让羽毛再飞一会儿
4楼2015-09-15 09:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

那个接头不是随便哪家公司都可以合成的，修饰过的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-15 10:04:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljuile0713

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主问一下，这个接头是用普通的反转录试剂盒就能实现吗，比如takara的反转录试剂盒？还是需要别的酶
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-07 11:17:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

引路者

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zljuile0713 at 2015-10-07 11:17:28
楼主问一下，这个接头是用普通的反转录试剂盒就能实现吗，比如takara的反转录试剂盒？还是需要别的酶

如果用那种接头的话这个酶必须是M-MLV体系的反转录酶，核心技术是在第一链cDNA的3‘端加上三个C。所以试剂盒给的接头引物的末端的3个G就是用来识别的。
赞一下 回复此楼
我的学习就是我对这个世界的歌颂，我的研究就是我对这个世界的敬仰
7楼2015-10-07 19:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljuile0713

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 引路者 at 2015-10-07 19:37:50
如果用那种接头的话这个酶必须是M-MLV体系的反转录酶，核心技术是在第一链cDNA的3‘端加上三个C。所以试剂盒给的接头引物的末端的3个G就是用来识别的。...

哦哦，原来如此，太感谢了！
赞一下 回复此楼
8楼2015-10-08 18:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0阿狸控0

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2019-08-23 16:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 litterone123 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +3 kotoko_ik 2026-03-23 4/200 2026-03-23 20:47 by 我的船我的海
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +6 纸鱼ly 2026-03-21 7/350 2026-03-23 19:06 by macy2011
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭