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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的蛋白定量
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] 目的蛋白定量

首先请虫友们注意是目的蛋白，不是总蛋白定量。
       本人欲做IP拉目的蛋白，结果有目的蛋白被拉下，可是后续实验需要扩大，所以我想知道我用了一定量的细胞（1*10^7）到底得到了多少微克目的蛋白。目前思路是做Western验证得到的蛋白，但是怎样确定我得到的目的蛋白是多少呢？不知有没有朋友用过Odessy，灰度分析是否可行，或者是其他更好的办法？希望虫友们提供帮助，sincerely
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1楼 2013-10-18 14:31:17
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-19 01:25:55
表达和纯化一个重组的目的蛋白,做Western的时候加样在同一个胶上,然后用来做标准比对.
对于重组蛋白你肯定知道加了多少纳克的, 跟IP出来的条带灰度比较一下
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2013-10-18 22:50:37
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-18 22:50:37
表达和纯化一个重组的目的蛋白,做Western的时候加样在同一个胶上,然后用来做标准比对.
对于重组蛋白你肯定知道加了多少纳克的, 跟IP出来的条带灰度比较一下

你的意思是不用敷抗体，只跑PAGE胶然后扫灰度吧。虫友可有好用的灰度分析软件推荐

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2013-10-19 00:51:39
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-10-19 01:26:01
内容已删除
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-19 01:04:50
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2013-10-19 00:51:39
你的意思是不用敷抗体，只跑PAGE胶然后扫灰度吧。虫友可有好用的灰度分析软件推荐
...

虫友说的很有道理，跑的是全蛋白，所以确实是一大团东西，但我也还没有重组蛋白，这是不是就没有办法了呢。可以考虑跑PAGE胶，和marker比对吗

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5楼2013-10-20 21:16:45
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