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bob1987

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 25小时
虫号: 1008454
注册: 2010-04-29
专业: 生物化学

[交流] PCR引物设计已有5人参与

大家好，
我现在在做PCR ，设计了一对引物。刚开始的时候，结果很好，大小以及测序都是正确的。但是最近几次却出现跑胶弥散的现象，没有目的条带。我用的是cDNA作为模板，我用同样的模板、酶、buffer做内参基因以及其他的基因都很好，就是我现在的这一基因，我快急死了，请高手帮帮我！！！
上游引物：5' CCA AGA CTC TGT ATG GAG TG 3'
下游引物：5' GGT CAC TGG AAG ATA TGG C 3'
mRNA序列：
      1 tgtgctgtgt gtcagagtgg attggagttg aaaaagcttg actggcgtca ttcgggagct
      61 ggatggcttg ggacatgtgc agccaagact ctgtatggag tgacatagag tgtgctgctc
   121 tggttggtga ggaccagcct ctttgcccag atcttcctga acttgacctt tctgaacttg
   181 atgtgaatga cttggataca gacagctttc tgggtggatt gaagtggtgt agcgaccaat
   241 cggaaatcat atccaaccag tacaacaatg agcctgcgaa catatttgag aagatagatg
   301 aagagaatga ggcaaacttg ctagcggtcc tcacagagac actggacagt ctccccgtgg
   361 atgaagacgg attgccctca tttgatgcac tgacagatgg agccgtgacc actgacaacg
   421 aggccagtcc ttcctccatg cctgacggca cccctccccc tcaggaggca gaagagccgt
   481 ctctacttaa gaagctctta ctggcaccag ccaacactca gctcagctac aatgaatgca
   541 gcggtcttag cactcagaac catgcagcaa accacaccca caggatcaga acaaaccctg
   601 ccattgttaa gaccgagaat tcatggagca ataaagcgaa gagcatttgt caacagcaaa
   661 agccacaaag acgtccctgc tcagagcttc tcaagtatct gaccacaaac gatgaccctc
   721 ctcacaccaa acccacagaa aacaggaaca gcagcagaga caaatgtgct tccaaaaaga
   781 agtcccatac acaaccgcag tcgcaacatg ctcaagccaa accaacaact ttatctcttc
   841 ctctgacccc agagtcacca aatttgtttt tataaatgtg ccatatcttc cagtgacccc
   901 aagggttccc catttgagaa caagactatt gagcgaacct taagtgtgga actctctgga
   961 actgcaggcc taactcctcc cacaactcct cctcataaag ccaaccaaga taaccctttc
   1021 aaggcttcgc caaagctgaa gccctcttgc aagaccgtgg tgccaccgcc aaccaagagg
   1081 gcccggtaca gtgagtgttc tggtacccaa ggcagccact ccaccaagaa agggcccgag
   1141 caatctgagt tgtacgcaca actcagcaag tcctcagggc tcagccgagg acacgaggaa
   1201 aggaagacta aacggcccag tctccggctg tttggtgacc atgactactg tcagtcactc
   1261 aattccaaaa cggatatact cattaacata tcacaggagc tccaagactc tagacaacta
   1321 gacttcaaag atgcctcctg tgactggcag gggcacatct gttcttccac agattcaggc
   1381 cagtgctacc tgagagagac tttggaggcc agcaagcagg tctctccttg cagcaccaga
   1441 aaacagctcc aagaccagga aatccgagcg gagctgaaca agcacttcgg tcatccctgt
   1501 caagctgtgt ttgacgacaa atcagacaag accagtgaac taagggatgg cgacttcagt
   1561 aatgaacaat tctccaaact acctgtgttt ataaattcag gactagccat ggatggccta
   1621 tttgatgaca gtgaagatga aagtgataaa ctgagctacc cttgggatgg cacgcagccc
   1681 tattcattgt tcgatgtgtc gccttcttgc tcttccttta actctccgtg tcgagactca
   1741 gtgtcaccac cgaaatcctt attttctcaa agaccccaaa ggatgcgctc tcgttcaaga
   1801 tccttttctc gacacaggtc gtgttcccga tcaccatatt ccaggtcaag atcaaggtcc
   1861 ccaggcagta gatcctcttc aagatcctgt tactactatg aatcaagcca ctacagacac
   1921 cgcacacacc gcaattctcc cttgtatgtg agatcacgtt caaggtcacc ctacagccgt
   1981 aggcccaggt acgacagcta tgaagcctat gagcacgaaa ggctcaagag ggatgaatac
   2041 cgcaaagagc acgagaagcg ggagtctgaa agggccaaac agagagagag gcagaagcag
   2101 aaagcaattg aagagcgccg tgtgatttac gttggtaaaa tcagacctga cacaacgcgg
   2161 acagaattga gagaccgctt tgaagttttt ggtgaaattg aggaatgcac cgtaaatctg
   2221 cgggatgatg gagacagcta tggtttcatc acctaccgtt acacctgtga cgctttcgct
   2281 gctcttgaga atggatatac tttacgcagg tcgaacgaaa ctgacttcga gctgtacttt
   2341 tgtggacgga agcaattttt caagtctaac tatgcagacc tagataccaa ctcagacgat
   2401 tttgaccctg cttccaccaa gagcaagtat gactctctgg attttgatag tttactgaag
   2461 gaagctcaga gaagcttgcg caggtaacgt gttcccaggc tgaggaatga cagagagatg
   2521 gtcaatacct catgggacag cgtgtccttt cccaagactc ttgcaagtca tacttaggaa
   2581 tttctcctac tttacactct ctgtacaaaa ataaaacaaa acaaaacaac aataacaaca
   2641 acaacaacaa caataacaac aacaaccata ccagaacaag aacaa

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